Опыт 7. Определение пигментов растений колориметрическим методомЦель работы: определить содержание хлорофиллов и каротиноидов методом колориметрирования.
Общие принципы экстракции пигментов Пигменты могут быть экстрагированы из свежего и фиксированного материала. При выборе экстрагирующих веществ необходимо учитывать растворимость пигментов и возможность их выделения данным растворителем из пигментно-липопротеидного комплекса, в виде которого пигменты находятся в пластидах. В зависимости от химического строения различают растворители полярные (спирты, ацетон) и неполярные (петролейный эфир, гексан, бензин и др.). Степень полярности растворителя определяется величиной его дипольного момента. Хлорофиллы и каротиноиды, являясь в основном липофильными соединениями, хорошо растворяются во всех растворяющих липиды соединениях: ацетоне, спирте, эфире, бензине, петролейном эфире и т.д. Однако полное извлечение пигментов из растительного материала достигается только при использовании полярных растворителей или смесью полярных и неполярных растворителей. Полярные растворители, вызывая денатурацию белка и нарушая связи пигментов с липопротеидным комплексом, обеспечивают быструю экстракцию всех пигментов. Для выделения пигментов чаще всего используют 80%-ный ацетон или 90%-ный спирт. Экстракцию проводят возможно быстрее. Пигменты экстрагируют последовательно несколькими порциями чистого растворителя, отделяя каждый раз раствор пигментов центрифугированием. При растирании навески листьев с растворителем необходимо добавлять небольшое количество СаСО3, МgСО3 или 1 н раствор NН4ОН для предотвращения разрушения пигментов. Вся подготовительная работа с пигментами ведется в затемненном помещении, на холоду. В ацетоновой вытяжке определяются количественно хлорофилл А, В и каротиноиды спектрофотометрическим способом.
|
