А М Ф О Т Е Р Н О С Т ЬБелки содержат кислые (СООН) и основные (NH2) группы. Благодаря этому они обладают буферными свойствами. Однако при физиологических рН их буферная емкость ограничена. Только гемоглобин, который содержит до 8% гистидина обла- дает существенной буферной емкостью, т.к. рI гистидина 7,6. Амфотерность позво- ляет разделить белки по заряду. Аналогично аминокислотам, они заряжаются поло- жительно при уменьшении рН, и отрицательно при его увеличении. При нейтраль- ных рН заряд белка зависит от соотношения кислых и основных аминокислот. Если преобладают кислые – то и заряд отрицательный, если основные – положительный, при рI заряд равен 0. Р А С Т В О Р И М О С Т Ь Так как белки несут много заряженных групп, то они водорастворимы. Раство- римость связана: • со взаимоотталкиванием молекул • с гидратацией белков – чем больше полярных аминокислот, тем больше гидратная оболочка (на 100 г белка может быть 30-50 г воды) Таким образом, растворимость белков зависит от заряда и наличия гидратной оболочки. Исчезновение одного или обоих этих факторов ведет к осаждению бел- ков. Методы осаждения белков 1. Высаливание — добавление солевых растворов (Na2SO4, (NH4)2SO4). Анионы и катионы соли взаимодействуют с зарядами белка и, в результате, за- ряд исчезает, и соответственно, исчезает взаимоотталкивание молекул. Одновре- менно пропадает гидратная оболочка. Это ведет к «слипанию» молекул и осажде- нию. Так как белки плазмы крови отличаются по размерам, заряду, строению, то можно подобрать такие количества соли, которые вызовут осаждение менее устой- чивых белков, пока другие еще будут растворены. Например, таким способом можно определять соотношение аль- бумины/глобулины. Альбумины, как более полярные молекулы, ос- таются в растворенном u1089 состоянии при 50% насыщении раствора нейтральными солями, в то время как глобулины в этих условиях уже осаждаются. В норме соотношение равно 1,5-2,3. Однако, не следует забывать, что при низких концентрациях соли способны взаимодействовать с ионными группами белков, отвечающих за внутримолекуляр- ные взаимодействия, приводить к их раскрытию и повышать растворимость. 2. Осаждение водоотнимающими средствами (ацетон, этанол) При этом происходит лишение белка гидратной оболочки, но не заряда, рас- творимость несколько снижается, но денатурации не наступает Например, антисептическое действие этанола. 3. Изменение рН ведет к исчезновению заряда в изоэлектрической точке, исчез- новению гидратной оболочки и снижению растворимости белков.
|
