Ход работы. 10 г дрожжей смешивают в ступке с 7 г песка и тщательно растирают, приливая небольшими порциями 40 мл 0,4%-ного раствор гидроксида натрия10 г дрожжей смешивают в ступке с 7 г песка и тщательно растирают, приливая небольшими порциями 40 мл 0, 4%-ного раствор гидроксида натрия. Растирание продолжают в течение 15 минут. После этого осадок отделяют путем центрифугирования (3 минуты при 3000 обмин). Центрифугат сливают в стакан и к нему добавляют небольшими порциями (по 0, 5 мл) 10%-ную уксусную кислоту до слабокислой реакции по лакмусу (5 - 6 мл). Полученный осадок нуклеопротеинов отделяют центрифугированием (5 минут при 5000 обмин). Гидролиз нуклеопротеинов. В колбу для гидролиза (с обратным воздушным холодильником) помещают осадок нуклеопротеинов и 10 мл 10%-ного раствора серной кислоты. Колбу закрывают пробкой с проходящим через нее воздушным холодильником (трубка длиной 70 см и диаметром 0, 7 - 0, 8 см) и смесь кипятят на сетке в течение 1 ч, поддерживая слабое кипение. Гидролизат отфильтровывают и в прозрачном растворе определяют наличие белков, пентозы, пуриновых оснований и фосфорной кислоты. Белки обнаруживают по биуретовой реакции (см. работу 2). Пентозу – по реакции с орцином. К 1 мл гидролизата добавляют 1 мл орцинового реактива и 1 мл концентрированной соляной кислоты, нагревают до кипения. Появляется зеленое окрашивание. При нагревании с 20%-ной соляной кислотой рибоза дегидратируется и превращается в фурфурол:
Последний конденсируется с орцином с образованием окрашенных соединений. Дезоксирибоза не дает этой реакции. Пуриновые основания обнаруживают по их реакции с аммиачным раствором оксида серебра. К 2 мл гидролизата приливают по каплям крепкий раствор аммиака до щелочной реакции по лакмусу и добавляют равный объем аммиачного раствора оксида серебра. Постепенно образуется осадок серебрянных солей пуриновых оснований. Фосфорную кислоту обнаруживают с помощью молибдата аммония. К 2 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте прибавляют 1 мл испытуемого раствора. Смесь слегка нагревают. Образуется желто-зеленый осадок молибдата аммония: 12 (NH4)2MoO4 + H3PO4 + 21HNO3 ® (NH4)3PO4´ 12MoO3 +
Работа 5. Качественные реакции Оборудование и реактивы: ступка с пестиком, пробирки химические, баня водяная, пипетки на 1, 2 и 5 мл, воронка Бюхнера, терка, пероксид водорода (0, 5%-ный и 2%-ный), пирогаллол (1%-ный), тирозин (насыщенный), марля, пластинка стеклянная, колба коническая на 100 мл, цилиндр мерный на 50 мл, 1%-ный раствор мочевины и тиомочевины, 0, 02%-ный раствор спиртовой фенолфта-леина, клейстер крахмальный (1%-ный), йод (1%-ный) в йодиде калия (3%-ном), фелингова жидкость. Материалы: картофель сырой, арбузные семечки, разбавленная слюна (рот ополаскивают 2-3 раза водой для удаления остатков пищи, отмеряют цилиндром 50 мл дистиллированной воды и ополаскивают ею рот в течение 3 - 5 мин. в несколько приемов. Собранную жидкость - примерно 50 - 60 мл - фильтруют через вату и фильтрат используют для работы).
|
