Ход работы. В каждую из 8 пронумерованных пробирок по приведенной ниже таблВ каждую из 8 пронумерованных пробирок по приведенной ниже табл. 1 вносят соответствующие растворы после перемешивания + 1 мл танина. Содержимое пробирок снова хорошо перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 минут. В той пробирке, где обнаружится максимальное помутнение среды, рН раствора будет соответствовать ИЭТ белка. Таблица 1
По результатам опыта сделайте вывод об изоэлектрической точке белка и о том, какие заряженные аминокислоты преобладают в его составе. Работа 3. Качественные реакции на белки Методы качественного обнаружения белков основаны на трех типах реакций: а) по пептидным связям белковой молекулы; б) по a-аминогруппе; в) по аминокислотным радикалам. Примером реакции первого типа служит биуретовая реакция, второго типа - нингидриновая реакция, а к третьему типу относятся многочисленные цветные реакции на радикалы аминокислот. По характеру цветных реакций третьего типа можно судить о качественном составе белков. Оборудование, реактивы: баня водяная, пробирки химические, стаканы химические на 100 мл; пипетки, градуированные на 1, 2, 5 и 10 мл; лакмусовая бумага, хлорид натрия (10%-ный), сульфат аммония (насыщенный), гидроксид натрия (10 и 30%-ном), сульфат меди (1%‑ ный), нингидрин (1%-ный в ацетоне 95%-ном), a-нафтол (0, 2%‑ ный спиртовой раствор), гипобромид натрия, ледяная уксусная кислота, серная, соляная и азотная кислоты (конц.), нитрит натрия (0, 5%-ный), сульфаниловая кислота (5%-ная), карбонат натрия (10%‑ ный), раствор плюмбита натрия. Материалы. Неразбавленный белок куриного яйца. Отделяют белок трех куриных яиц от желтков. Считая, что масса белка в одном яйце в среднем равна 33 г, получают около 100 мл неразбавленного раствора белков куриного яйца. Этот раствор содержит 88% воды, 1% углеводов и 0, 5% минеральных веществ; остальное приходится на белок. Таким образом, полученный неразбавленный белок куриного яйца представляет собой примерно 10%-ный раствор белка. Разбавленный раствор яичного альбумина. Белок одного куриного яйца после отделения от желтка хорошо взбалтывают и затем смешивают в колбе с десятикратным объемом дистиллированной воды. Раствор фильтруют через двойной слой смоченной водой марли или кусок стираного полотна, помещенные в воронку. Отфильтровывают раствор яичного альбумина; в осадке остается яичный глобулин. Учитывая, что концентрация альбумина в белке куриного яйца составляет около 6%, полученный разбавленный раствор яичного альбумина является примерно 0, 5%-ным.
|
