Глюкоза легко окисляется по первому атому углерода (показано стрелкой).Ферментативное окисление глюкозы кислородом под действием глюкозооксидазы. В данной работе перед нами стояла задача определить максимальную скорость и константу Михаэлиса для реакции ферментативного окисления глюкозы. Побочным продуктом реакции окисления β-D-глюкозы является пероксид водорода.
Для измерений нами была использована методика, описанная в [5]. Скорость реакции может быть рассчитана, если известно изменение концентрации реагента или продукта за некоторое время. Определение концентрации растворённого вещества можно осуществить спектрофотометрическим методом, если вещество поглощает в данной области спектра и его сигнал можно идентифицировать среди прочих. В нашей работе определение концентрации проводилось косвенным путём за счёт реакции продукта окисления глюкозы H2O2 с иодидом калия. При этом по умолчанию считалось, что вторая реакция протекает намного быстрее, чем анализируемая, и отсутствуют побочные реакции восстановления пероксида водорода. Смешение реагентов проходило непосредственно в кювете прибора. В качестве фона использовали буферный раствор с pH=6.00, приготовленный из однозамещённого фосфорнокислого калия KH2PO4. Методика эксперимента состояла в том, что выделяющийся в реакции окисления глюкозы пероксид водорода вводили в реакцию с раствором иодида калия: Образующийся анион имеет интенсивный максимум поглощения при 350 нм, который регистрируется спектрофотометром. На приборе установили длину волны 2860см-1, что соответствует частоте ≈8,58*1014 Гц, или длине волны 350нм.
|
