Протокол работы №2. Получение первичной культуры методом естественной миграции клеток из ткани на субстрат.

!	§ В работе используется только стерильный инструмент, посуда и материалы. § Для каждого типа ткани используются только свой хирургический инструмент. § Начиная с пункта 1 все операции осуществляются под ламинаром.

1.Пробирки с фрагментами легкого и глазное яблоко (отобранные в 4-м пункте Протокола №1 для второй части работы) достать из термостата и поместить под ламинар.

2.Захватить ткань глазным пинцетом и отрезать как можно меньший кусочек ткани.

3.Снять отрезанный кусочек с ножниц иглой и «посадить» его на дно пустой культуральной чашки. Рядом поместить еще несколько кусочков.

4. Используя пинцет, накрыть кусочки покровным стеклом, слегка его придавив пинцетом ко дну чашки, слегка расплющивая, но не давя фрагменты ткани.

5. Заполнить чашки культуральной средой так, чтобы стекла были слегка покрыты средой.

6. Закрыть чашки и поместить их в углекислотный инкубатор (37 ⁰С, 10% СО₂).

7. Через неделю начать наблюдать за кусочками каждые 24 часа. К этому времени клетки начинают мигрировать из ткани на субстрат, вокруг кусочков образуется так называемая зона (или граница) роста. Вначале появляются единичные фибробласты, которые заметны в виде длинных веретеновидных клеток. При образовании зоны роста необходимо произвести замену среды.

8. Когда пространство между кусочками будет заполнено клетками, покровное стекло снимают, убирают кусочки ткани, производят замену среды. В течении следующей недели каждые 24 часа наблюдают за образованием монослоя клеток.

 

Миграция клеток на субстрат из фрагмента ткани

Почему клетки в суспензии имеют сферическую форму?

 

 

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

За счет чего происходит прикрепление клетки к подложке (субстрату) и какие основные механизмы миграции клетки из ткани на субстрат и движения клетки по субстрату?

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________