Концентрация Арглабина в растворе, 10-5моль/л
Рисунок 34 - Адсорбция Арглабина на наночастицах сывороточного альбумина
Так, с увеличением концентрации Арглабина в растворе наряду с отмеченным выше снижением степени связывания, доля лекарства на поверхности наночастиц растет и в предельном случае достигает 13,5 % от массы наночастиц сывороточного альбумина. Уравнение адсорбции (x/m = 3,06c) показывает, что долю Арглабина в комплексе полимер-лекарство можно еще существенно повысить. Наглядно наночастицы сывороточного альбумина, иммобилизованные нативным Арглабином, можно видеть на снимках, полученных на трансмиссионном электронном микроскопе CM 12 (Philips) и представленных на рисунке 35.
Рисунок 35 - Электронно-микроскопические снимки наночастиц с адсорбированным на поверхности Арглабином (нативным)
На снимках видно возможное образование ассоциатов, но отдельные частицы имеют малый размер, что позволяет их использовать в качестве носителей для транспорта лекарственного препарата «Арглабин». 96
 
Высокая степень адсорбции лекарства на поверхности предварительно полученных наночастицах сывороточного альбумина позволяет использовать липофильную форму лекарства в виде полимерных наносистем. В продолжение исследований нами изучена иммобилизация противоопухолевого препарата «Арглабин» в матрицу сывороточного альбумина методом включения, который предполагает введение биологически активного вещества в реакционную среду непосредственно в процессе сшивки альбумина. Для иммобилизации Арглабина в наночастицы лекарство предварительно растворили в водном растворе альбумина и проводили десольвацию, при этом использовали две формы лекарственного препарата (липофильная и гидрофильная формы); концентрацию лекарственного вещества при этом изменяли от 0,15 10-5 моль/л до 0,6 10-5 моль/л, с использованием следующих соотношений лекарство: альбумин 1:20, 1:10, 3:20, 1:5. К 20 мг сывороточного альбумина добавляли в 4 пробирки соответственно от 1 до 4,0 мг лекарства и по 1 мл воды в каждую из них. рН всех растворов доводили до 8,5 и оставляли на 2 ч. при постоянном перемешивании. Так как в этом случае использовалась нерастворимая в воде липофильная форма Арглабина, в пробирки предварительно добавляли по 1 мл этанола. Для образования наночастиц при постоянном перемешивании посредством мининасоса в растворы добавляли 2 мл этанола и 8%-ный раствор глутарового альдегида и перемешивали в течение 24 ч. Затем растворы отделяли от осадка по вышеописанной методике и полученные частицы промывали водой. Количество несвязавшегося лекарства в растворе определяли методом УФ-спектрофотометрии (λ=204 нм). Размеры частиц, полученных включением липофильного Арглабина, их полидисперсность и поверхностный заряд определяли методом фотонной корреляционной спектроскопии, результаты которой приведены в таблице 14.
Таблица 14 - Физико-химические характеристики наночастиц альбумина, иммобилизованных липофильным Арглабином: Т =250С; САЛЬБ=20 мг/мл
97
По данным таблицы видно, что полученные частицы различаются по размерам и имеют мономодальное распределение. Во всех случаях дисперсная система стабильна, так как ζ-потенциал частиц имеет достаточно низкие значения. Из таблицы также видно, что данные по выходу наночастиц, полученные двумя методами, корреллируют между собой. Степень связывания Арглабина с наночастицами альбумина определяли УФ-спектрофотометрическим методом (λ=204 нм). До проведения спектрофотометрического анализа растворы частиц с лекарственным веществом промывали смесью вода-этанол и пропускали через колонки Sephadex. Ниже приведена зависимость степени связывания от массы лекарства, иммобилизованного в наночастицы сывороточного альбумина (рисунок 36).
0,15 0,30 0,45 0,60
|
