Количественное определение белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой (нефелометрический метод)

Принцип метода

Белок при взаимодействии с сульфосалициловой кислотой подвергается денатурации. Раствор становится мутным. Степень мутности пропорциональна денатурации белка в растворе.

Реактивы

1. 3 % раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9 % раствор хлорида натрия.

3. 1 % стандартный раствор альбумина: 1 г лиофилизированного альбумина

растворяют в 0,9 % растворе хлорида натрия в мерной колбе на 100мл. Реактив стабилизируют добавлением 1 мл 5 % раствора азида натрия. При хранении в холодильнике раствор стабилен в течение 2 мес.

Ход определения

1) В пробирку отмеривают 1,25 мл профильтрованной мочи,

2) добавляют 3,75 мл раствора сульфосалициловой кислоты,

3) тщательно перемешивают.

4) Через 5 минут определяют оптическую плотность раствора на ФЭКе. Длина волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр), кювета с толщиной слоя 5 мм. Контролъ: 1,25 мл исследуемой мочи смешивают с 3,75 мл 0,9 % раствора NаС1.

5) Концентрацию белка в моче определяют по калибровочному графику. Построение калибровочного графика: готовят разведения стандартного раствора альбумина (табл. 2). Каждое из полученных разведений обрабатывают так же как опытную пробу.

 

 

Таблица 2. Приготовление разведений стандартного раствора альбумина

 

№ пробирки	Стандартный р-р (мл)	0,9%NaCI (мл)	Концентрация белка г/л
	0,05	9,95	0,05
	0,1	9,9	0,1
	0,2	9,8	0,2
	0,5	9,5	0,5
	1,0	9,0	1,0

 

Прямолинейная зависимость величин оптической плотности и концентра­ции белка сохраняется до 1 г/л. При более высокой концентрации белка в пробе мочу следует развести и разведение учитывать при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче веществ, содержащих йод в случае приема йодсодержащих препаратов, использовании сульфаниламидных средств, больших доз пенициллина.

Биуретовый метод

Принцип метода

Белок при взаимодействии с сульфатом меди в щелочной среде образует комплексы фиолетового цвета. Интенсивность развивающейся окраски пропорциональна концентрации белка.

Реактивы

1.10% раствор ТХУ. 2. 20 % раствор Си5О₄. 3.3% раствор NаОН.

Ход определения

1) К 5 мл мочи прибавляют 3 мл 10 % раствора ТХУ для осаждения белка.

2) Жидкость центрифугируют.

3) Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой.

4) К осадку белка добавляют 1 мл NаОН и 0,25 мл Си5О₄,

5) Перемешивают и центрифугируют;

6) Надосадочную жидкость колориметрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против дистиллированной воды.

7) Предварительно строят калибровочный график, с помощью которого определяют концентрацию белка в моче.