Диагностческие преператыТакие препараты имеют различное назначение: а) индентификация выделенного микроба (диагностические сыворотки, фаги, бактерйоцины) б) Обнаружение антител в сыворотке крови (диагностикумы) в) выявление микробной сенсибилизапии (аллергены) 1.6.1. Диагностические сыворотки По типу реакций, в которых они используются диагностические сыворотки делят на агглютинирующие, преципитирующие, - гемолитические, противовирусные и пр. Общий принцип их приготовления — гипериммунизацая животных (обычно кроликов) соответствующимиантигенами. Агглютинирующие сыворотки. Цельные нёистощенные сыворотки содержат антитела ко всем антигенам данного микроба-видовым и групповым. Их применяют для реакции в пробирках, где сыворотка должна быть разведена до титра, указанного на этикетке ампулы. Титром алютинирующей сыворотки называют максимальное разведение, в котором она еще способна агглютинировать культуру, использованную для иммунизации. В низких разведениях реакция может быть неспецифической за счет наличия антител к антигенам, общим для разных, групп бактерий. Из таких сывороток можно приготовить,адсорбированные (истощенные) сыворотки путем связывания «ненужных» антител соответствующими антигенами. Такие сыворотки часто называтют моноспецифическими, монорецепторными. и применяют только в одном рабочем разведении для реакции агглютинации на стекле. Например, специфическая, брюшнотифозная О-сыворотка содержит антитела к 0-антигенам NN 9, 12. Отдельно готовят сыворотки к Н-антигену. Для приготовления Н-сыворотки, иммунизацию животного, проводят живой культурой хорошо сформированными жгутиками и удаляют О-антитела при помощи сорбции взвесью гретых бактерий. Бактерии-адсорбенты удаляют из сыворотки путем центрифугирования фильтрования. Прецитирующие сыворотки —применяют для обнаружения антитена в экстракте и исследуемого материала (кожа, моча, и т. д.). Обычно используют в неразведенном виде. Титр преципитирующей сыворотки определяется по максимальному разведению антигена с которым наблюдается положительная реакция. Преципитацию проводят в живой среде (кольцепреципитации), либо в геле (реакция иммунодиффузии по Оухтерлони, иммуноэлектрофорез). Гемолитические сыворотки — готовят путем гипериммунизации кроликов взвесью чужеродных эритроцитов. В практике микробиологических исследований используют гемолитическую сыворотку к эритроцитам барана для остановки реакции связывания комплемента. Нейтрализующие сыворотки — их применение основано на специфической нейтрализации бактериальных токсинов и биологической активности вирусов (цитопатический эффект, гибель животных, реакции гемагглютинации, гемадсорбции). Иммунофлюоресцирующие сыворотки — применяют при экспресс-диагностике с целью быстрого обнаружения бактерий и вирусов в исследуемом материале. Используют два варианта реакции (по Кунсу): а) прямой метод одноэтапная обработка материала специфической рудной сывороткой меченной флюорохромом (изоцианат флюрооресцеина); б) непрямой (двухэтапный) метод — последовательная обработка специфической (диагностической) немеченной сывороткой (первый этап) и флюоресстирующей сывороткой, содержащей меченные антитела против видовых глобулинов диагностической сыворотки (второй этап). Например, при дизентерии на первом этапе мазок из испражнений больного обрабатывают специфичекой диагностической сывороткой во влажной камере, при температуре 37 0 С в течение 20—30 мин, затем препарат предварительно промывают от избытка антител. На втором этапе препарат обрабатывают антиглобулиновой флюоресцирующей сывороткой, которая выявляет свечение комплекса антиген (дизентерийная палочка) — антитело. В клинике - эти методы особенно полезны для индикации микоплазм и вирусов, выделение и, изучение которых, традиционными микробиологическими приёмами представляет значительные технические трудности 1.6.2 Диагностикумы К этой группе относятся препараты, предназначенные для определения антител к возбудителям инфекционных заболеваний. Их активным началом являются микробные антигены, которые могут быть представлены в корпускулярной (взвеси бактериальных клеток (вирионов), растворимой или связанной формах. В последнем случае извлеченные антигены (например токсины) сорбируют или химически связывают с инертным корпускулярным носителем; чаще всего с эритроцитами (эритроцитарные диагностикумы). Это позволяет во много раз повысить чувствительность реакции, то есть выявить минимальное количество антител. В зависимости от применения диагностикумов используют реакцию агглютинации (со взвесью убитых или живых бактерий), реакцию непрямой гемагглютинации (с эритроцитарными диагностикумами), реакцию связывания комплемента — РСК (цельные клетки, вирусы или растворимые антигены). Отдельную группу составляют неспецифические антигены для серологической диагностики сифилиса, используемые реакциях Вассермана, Кана, Закса-Витебского.
|
