Задание 6. Окрашивание по Романовскому-ГимзеНа предметном стекле готовят мазок культуры бактерий (спирохет) или крови, фиксируют в жидком фиксаторе (метаноле, этаноле, смеси этанола с эфиром 1: 1). На мазок наносят рабочий раствор красителя Романовского-Гимзе (1 капля красителя на 10 капель дистиллированной воды) на 10-20 минут. Затем препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Эритроциты крови окрашиваются в розово-коричневый, лейкоциты в сиреневый (их ядра – в фиолетовый), бактериальные клетки – в красно-фиолетовый. Контрольные ВОПРОСЫ 1. Какие группы красителей используют для окрашивания препаратов микроорганизмов? 2. Чем отличаются простые и дифференцированные методы окрашивания препаратов микроорганизмов? 3. Какие красители наиболее часто используют в микробиологических лабораториях? 4. Какие запасные включения можно обнаружить в клетках микроорганизмов? Какими красителями можно их обнаружить? 5. Поясните принцип окрашивания слизистых капсул. 6. На какой особенности эндоспор основаны методы их выявления? 7. Опишите методы окрашивания спор в клетках микроорганизмов. 8. Поясните принципы окрашивания жгутиков. 9. В чем сущность метода окрашивания по Граму? 10. Каким способом можно выявить кислотоустойчивость клеточной стенки микроорганизмов? 11. Для какой цели используют краситель Романовского-Гимзе? 1.3. Морфологические особенности и ультраструктура Цель занятия Познакомиться с особенностями морфологии и ультраструктуры актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий и микоплазм, а также с особенностями приготовления и окрашивания их препаратов. Основные сведения Актиномицеты могут образовывать структуры, напоминающие мицелий одноклеточных грибов, их клетки способны к ветвлению, без перегородок. Гифы актиномицетов 100–600 мкм длиной и 0, 2–1, 2 мкм толщиной. Актиномицеты относятся к фирмикутным бактериям и окрашиваются по Граму положительно. Они неподвижны, лишены выраженной капсулы, жгутиков и пилей. В отличие от других бактерий актиномицеты способны размножаться не только поперечным делением, но и спорами. Актиномицетам свойственны характерные органы плодоношения – спороносцы, имеющие разнообразную форму. Они могут быть прямыми, волнистыми, штопорообразными и др. Строение спороносцев – один из основных диагностических признаков для определения вида актиномицетов. Для микроскопического исследования используют как нативные, так и фиксированные препараты, окрашенные простыми методами и по Граму. Клетки спирохет нитевидные, закрученные в виде спирали, в периплазматическом пространстве их клеточной оболочки располагаются сократительные фибриллы, которые прикрепляются к полюсам клетки и оплетают ее по направлению к центру. Фибриллы обладают сократительной активностью и определяют спиральную форму и подвижность спирохет. Патогенные спирохеты 3–20 мкм длиной и 0, 1–0, 5 мкм толщиной, представители родов спирохет различаются по числу и характеру завитков клетки, а также по характеру движения (табл. 1). Большинство спирохет плохо окрашиваются анилиновыми красителями и по методу Грама, поэтому их морфологию чаще изучают в нативных препаратах с помощью темнопольного или фазово-контрастного методов световой микроскопии. Можно изучать и фиксированные мазки, окрашенные по Романовскому-Гимзе. Хламидии и риккетсии являются облигатными внутриклеточными паразитами, относятся к грамотрицательным бактериям. Клетки риккетсий полиморфны (палочковидные, кокковидные, реже нитевидные), размером 0, 5–4, 0 мкм, неподвижны, не имеют капсул, спор и жгутиков. Окрашиваются по методу Здродовского, чаще используют люминесцентную микроскопию. Морфология хламидий зависит от стадии их цикла развития. Внеклеточные формы (элементарные тельца) малых размеров (0, 2–0, 4 мкм), овальную форму. Внутриклеточные формы (ретикулярные тельца) более крупные (0, 5–1, 0 мкм), плеоморфные, метаболически активные и способные к бинарному делению. Клетки хламидий неподвижны, не имеют спор. Микроколонии хламидий внутри клеток после окрашивания по Романовскому-Гимзе изучают методом световой микроскопии, но чаще используют электронную и люминесцентную микроскопию. Клетки микоплазм лишены клеточной стенки, плеоморфные, очень мелкие (0, 2–0, 3 мкм), подвижны за счет внешнего цитоскелета. Морфологию микоплазм изучают только с помощью электронной микроскопии. Таблица 1
|
