Реактивы. 1) Аммиачный буфер, рН 10,5-10,6 (20 г хлорида аммония растворяют в 100 мл 25% раствора аммиака); 2) 0,02% раствор фенола перекристаллизованного; 3) 12,5%

1) Аммиачный буфер, рН 10, 5-10, 6 (20 г хлорида аммония растворяют в 100 мл 25% раствора аммиака); 2) 0, 02% раствор фенола перекристаллизованного; 3) 12, 5% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ); 4) 36% раствор соляной кислоты; 5) 1% раствор гексацианоферрата (III) калия K₃[Fe(CN)]₆.

Стандартный раствор 4‑ аминоантипирина 1 г/л для построения калибровочного графика.

Проведение анализа

Обследуемый принимает утром натощак амидопирин из расчета 6 мг/кг веса (A_общ). Собирается 4 порции мочи в интервале соответственно от 1 до 6 часов, 6-12, 12-24 и 45-48 часов. Объем мочи измеряется. Не позже чем через 24 часа, моча центрифугируется или фильтруется.

Далее исследуется концентрация 4‑ аминоантипирина (опыт 1) и N‑ ацетил-4-аминоантипирина (опыт 2):

	Опыт 1, мл	Опыт 2, мл
Моча Аммиачный буфер Соляная кислота	1, 5 0, 3 0, 3	1, 5 –– 0, 3
	Выдержать 15 минут при комнатной температуре	Закрыть пробкой. Выдержать 15 минут при 100°С
	Пробирки охлаждают и центрифугируют при 1500 об/мин
Аммиачный буфер	––	0, 6
Вновь центрифугируют при 1500 об/мин
Надосадок Дистилл. вода ТХУ Раствор фенола Р-р K3[Fe(CN)6]	0, 6 –– 0, 5 2, 0 0, 1	0, 8 0, 2 –– 2, 0 0, 1
	Инкубируют 10 минут при 20-25°С. Не позднее чем через 60 минут измеряют оптическую плотность проб против воды при 510 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Концентрацию продуктов биотрансформации амидопирина в моче (мг/л) определяют по калибровочному графику, построенному с использованием калибровочных растворов антипирина в диапазоне от 3 до 20 мг/л.

Количество 4-аминоантипирина (A₁, мг в порции мочи) находят, умножая его концентрацию (опыт 1) на соответствующий объем мочи (л).

Общее количество 4-аминоантипирина и N‑ ацетил-4-аминоантипирина (A₁₊₂, мг в порции мочи) находят, умножая их концентрацию (опыт 2) на соответствующий объем мочи (л).

Количество N-ацетил-4-аминоантипирина (A₂), выделенного с мочой за сутки, находят по разности содержания в опыте 1 и опыте 2.

Монооксигеназную активность печени оценивают по формуле:

Активность монооксигеназ (%) = , где

A₁ – количество 4-аминоантипирина в порции мочи,
A_общ – количество введенного амидопирина.

Ацетилирующую активность ферментных систем печени находят по формуле:

Активность трансфераз (%) = , где

A₂ – количество N-ацетил-4-аминоантипирина в порции мочи,
A₁ – количество 4-аминоантипирина в порции мочи.

Общую обезвреживающую способность ферментных систем печени оценивают по формуле:

Общая активность (%) =

Клинико‑ диагностическое значение

Изучение скорости метаболизма лекарственных веществ, поступающих в организм, позволяет оценивать активность ферментных систем печени, участвующих в биотрансформации ксенобиотиков.

Снижение скорости наблюдается при заболеваниях печени (цирроз, гепатит), с увеличением возраста.

Увеличение скорости наблюдается при регулярном приеме некоторых веществ – барбитураты, этанол.