Определение редуктазы стандартным методом

Приготовление основного раствора метиленового голубого.

10 г метиленового голубого заливают 100 мл 96 %-ного этилового спирта и оставляют в термостате на сутки при температуре 37 ± 1⁰С, затем фильтруют в термостате при той же температуре. Срок хранения раствора в термостате (t° – 37 ± 1) не более 3 мес. Из этого раствора готовят рабочий.

Приготовление рабочего раствора.

Основной раствор помещают в водяную баню при температуре 45 ± 1⁰С на 5-10 мин, перемешивают до полного растворения кристаллов. Затем быстро охлаждают до 20⁰С, отмеривают пипеткой 5 мл этого раствора и помещают в колбу со 195 мл дистиллированной воды, размешивают. Срок хранения рабочего раствора в холодильнике не более 7 сут.

Техника определения:

1. В стерильную пробирку пипеткой отмерить 1 мл рабочего раствора метиленового голубого, 20 мл молока; закрыть резиновой пробкой, размешать путем трехкратного переворачивания пробирки и поставить в редуктазник, где температура 37 ± 1⁰С (при его отсутствии можно использовать водяную баню для жиромеров). Уровень воды в водяной бане должен быть выше уровня молока в пробирках; пробирки предохранять от воздействия света.

2. При постановке пробирок в баню заметить время и затем наблюдать за обесцвечиванием их содержимого через 20 мин, 2 и 5, 5 ч.

3. По таблице 5 оценить качество молока и определить класс, к которому оно относится по бактериальной загрязненности.

Окончанием анализа считать момент обесцвечивания окраски молока. Остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (до 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (не более 1 см) в расчет не принимается. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.

 

Ускоренная редуктазная проба

1. В пробирку отмерить 10 мл молока, затем нагреть его до 38-40⁰С, помещая пробирку с молоком в редуктазный аппарат или водяную баню.

2. В нагретое молоко влить 1 мл раствора метиленового голубого, приготовленного так же, как и для стандартного метода, но разведенного в 10 раз (1 мл рабочего раствора, применяемого при стандартном методе, разбавить 9 мл дистиллированной воды). Этот раствор готовят перед постановкой пробы. Размешать содержимое пробирки и вновь поставить в водяную баню при температуре 38-40⁰С (для контроля поставить такую же пробу молока в пробирке, но без метиленового голубого).

3. После постановки пробы пробирки осмотреть через 8 мин и через 1 ч для установления времени обесцвечивания содержимого. Затем, пользуясь таблицей 5. определить число бактерий в молоке и его класс.