Подготовка и проведение электрофореза

Электрофоретическое разделение проводят на приборе ПЭФ-1. Он состоит из камеры с крышкой, двух кювет, двух электродов (рис. 4)

 

1 2

3 4

Катод + Анод

Рис. 4. Аппарат для низковольтного электрофореза на бумаге:

1 – крышка; 2 – носитель (бумага); 3 – фитиль-мостик;

4 – буферная камера; 5 – изолирующая пластина

 

Электроды при работе помещают в кюветы и с помощью проводов и штекеров под­ключают к блоку питания. Так как электрофоретический аппарат рабо­тает под напряжением 200-400 В, он должен быть надежно заземлен.

Для проведения электрофореза вырезают полоску быстро впитывающей хроматографической бумаги длиной 33 см и шириной 5 см. Поперек полоски, на расстоянии 8-10 см от края проводят простым карандашом тонкую линию старта. На отмеченную карандашом линию наносят микропипеткой или с по­мощью покровного стекла исследуемую сыворотку крови в количестве 0,01-0,03 мг. Полоску смачивают буфером и просушивают между листами фильтровальной бумаги. Затем подсушенную полоску помещают в электрофоретическую камеру так, чтобы её концы были погружены в кюветы, заполненные буфером. В зависимости от конструкции в камеру можно помещать одновременно 7-10 полосок.

Камеру закрывают крышкой и включают блок питания в сеть. Про­цесс электрофореза проводят при напряжении З-8 В на 1 см длины бу­мажной полоски в течение 18-20 ч без перерыва при комнатной темпе­ратуре. Сила тока зависит от подаваемого напряжения, природы и рН буферного раствора, толщины бумаги и температуры. Сила тока не дол­жна превышать 0,1-0,3 мм на 1 см ширины бумажной полоски. Регулиру­ют силу тока с помощью выпрямителя.

По окончании электрофореза выключают ток и бумажную полоску вы­нимают из камеры. Удаляют избыток влаги из полоски с помощью фильтровальной бумаги. Затем полоску подвешивают в вертикальном положении в сушильном шкафу на 15 мин при температуре 105-115 ⁰С.