Показатели основных гуморальных факторов иммунитета здоровых людей

Показатели	Дети	Взрослые
Лизоцим, мкг/мл	5, 4	3, 8
Комплемент, СН50	30-50	60-80
Пропердин, ед	2-4	4-8

Дифференцировка лимфоцитов на кластеры дифференциации
по поверхностным CD-маркерам

Изучение лимфоцитов начинается с их выделения из крови. Мононуклеарные лейкоциты (лимфоциты, моноциты) отделяют от других клеток крови (гранулоцитов и эритроцитов) центрифугированием в градиенте плотности специальной смеси препаратов (фикол, верографин). Имеющие большую плотность эритроциты и гранулоциты образуют осадок на дне пробирки, а мононуклеарные клетки образуют кольцо на поверхности градиентной смеси, откуда могут быть перенесены в отдельную пробирку и отмыты от градиентной смеси. Дифференцировка популяций и субпопуляций лимфоцитов связана с выявлением поверхностных CD-маркеров – антигенов (табл. 8) с помощью соответствующих специфических антител.

Определение количества лимфоцитов разных популяций (субпопуляций) по поверхностным маркерам проводится с помощью двух методик:

- люминесцентной или световой микроскопии мазков крови или взвеси мононуклеаров, обработанных соответствующими моноклональными антителами, меченными флюорохромом или ферментом (для одного образца занимает неделю);

- автоматического подсчета клеток с использованием проточного цитофлюориметра (для одного образца занимает несколько часов).

Таблица 8

Количественное содержание лейкоцитов в циркулирующей
крови здоровых людей

Популяция/субпопуляция	CD-маркер	Процент от всего количество лимфоцитов	Абсолютное количество клеток 109 в 1 л крови
Лимфоциты (всего)			1, 50–3, 50
Естественные киллеры		10 (5–15)	0, 20–0, 30
Т-лимфоциты (всего)		75 (60–90)	1, 00–2, 50
Т-хелперы		50 (32–65)	0, 50–1, 60
(Т-киллеры)		25 (16–39)	0, 30–0, 90
В-лимфоциты		15 (10–25)	0, 30–0, 90

Анализ функциональной активности Т- и В-лимфоцитов

1. Функциональную полноценность Т-лимфоцитов косвенно оценивают с помощью кожно-аллергической пробы, отражающей интенсивность реакций ГЗТ в отношении наиболее микробных антигенов (стрептококковых, туберкулина, дифтерийного анатоксина). Антиген вводят внутрикожно и через 48 часов измеряют диаметр инфильтрата – уплотнения, отражающий интенсивность реакции ГЗТ.

2. Для количественной оценки пролиферации Т- и В-лимфоцитов в ответ на распознавание конкретного антигена оценивают пролиферативную активность клеток в реакции бласттрансформации лимфоцитов. Взвесь лимфоцитов обрабатывают поликлональным митогеном (Т-лимфоциты – препаратом из растений семейства Бобовые, В-лимфоциты – компонентами бактерий), инкубируют и добавляют ³Н-тимидин. Через 2–3 суток инкубации измеряют включенную клетками радиоактивность (³Н-тимидин включается в ДНК клеток при их активной пролиферации).

3. Функции Т-лимфоцитов оценивают по их способности продуцировать цитокины. Для этого после активации культуры Т-лимфоцитов определяют типы цитокинов и их количество в культуральной среде. Количество цитокинов определяют по их биологической активности или выявляют как антигены с помощью специфических МКАТ и ИФА.

4. Функции В-лимфоцитов косвенно оценивают по уровням иммуноглобулинов и изогемагглютининов в сыворотке крови.

Определение концентрации иммуноглобулинов четырех
основных изотипов

Содержание в сыворотке крови иммуноглобулинов четырех основных изотипов (IgG, IgM, IgA, IgE) определяют, пользуясь наборами специфических антисывороток или МКАТ, полученных против изотип-специфических антигенов этих иммуноглобулинов. Для определения количественного содержания иммуноглобулинов разных изотипов в биологических жидкостях используют радиальную иммунодиффузию (по Манчини), твердофазный ИФА или РИА, метод иммунотурбидометрии.

Радиальная иммунодиффузия по Манчини. В геле, содержащем специфическую антиглобулиновую антисыворотку, делают лунки, которые заполняют исследуемыми сыворотками. Из лунок молекулы иммуноглобулинов диффундирую в гель и образуют кольца преципитации с соответствующими антииммуноглобулиновыми антителами. Количественное содержание иммуноглобулинов устанавливают по диаметру колец преципитации.

Содержание лабораторной работы