Определение числа каталазы солода

Цель работы: определение числа каталазы солода.

Оборудование, реактивы и материалы: аналитические и технические весы, термостат, водяная баня, термометр, центрифуга, фарфоровая ступка с пестиком, воронки с бумажными фильтрами, колбы Эрленмейера вместимостью 50 и 250 см³, бюретка, мерные колбы вместимостью 100 и 500 см³, пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 20 см³; кварцевый песок, фосфатный буферный раствор с pH 7, 38 (11, 876 г гидроортофосфата натрия Na₂HPO₄·2H₂O растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды, 9, 078 г безводного дигидроортофосфата калия KH₂PO₄ растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды, смешивают 80 см³ раствора гидроортофосфата натрия и 20 см³ дигидроортофосфата калия), фосфатно-цитратный буферный раствор с pH 7, 4 (4, 204 г лимонной кислоты растворяют в 200 см³ дистиллированной воды, 35, 598 г гидроортофосфата натрия Na₂HPO₄·2H₂O растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды, затем растворы смешивают из расчета 1, 83 г лимонной кислоты на 18, 17 г гидроортофосфата натрия), раствор пероксида водорода с массовой долей 1 %, раствор серной кислоты с массовой долей 10 %, раствор перманганата калия с концентрацией 0, 1 моль/дм³; ферментная вытяжка каталазы (5 г солода или размолотого зерна растирают в ступке с кварцевым песком и 20 см³ фосфатного буфера. Содержимое ступки количественно переносят в колбу, используя для ополаскивания ступки еще 30 см³ буферного раствора. Смесь перемешивают и ставят в термостат или на водяную баню при 37 °С на 15 мин, после чего смесь фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют).

 

Ход работы

 

В две колбы вносят по 20 см³ фильтрата. В одну колбу вливают 5 см³ раствора серной кислоты для инактивации фермента, затем в две колбы – по 20 см³ воды и по 3 см³ раствора пероксида водорода с массовой долей 1%, перемешивают, и оставляют стоять в термостате при 37 °С на 15-20 мин. По истечении указанного времени в опытную колбу добавляют 5 см³ раствора серной кислоты, перемешивают и остаток пероксида водорода в обеих колбах титруют раствором перманганата калия до слаборозовой окраски, не исчезающей в течение 30 с.

Активность каталазы К, мг, выражают в миллиграммах пероксида водорода, разложившегося за время инкубации, на 1 г растительного материала:

К =

 

где V и V ₁ – соответственно объем КMnО₄, пошедшего на

титрование в контроле и опыте, см³;

1, 7 – масса Н₂О₂, мг, соответствующая 1 см³ раствора

КМnО₄ с концентрацией 0, 1 моль/дм³;

m – масса навески растительного материала, г.

 

Оформление результатов

 

Полученные результаты вносят в таблицу.

 

Пробы	Объем КMnО4, пошедший на титрование	Активность каталазы, мг
контроль
опыт

 

 

Контрольные вопросы и задания

1. Назовите субстрат для действия каталазы. К какому классу ферментов относится каталаза?

2. В чем суть метода определения активности каталазы в солоде?

3. На каком принципе основан метод определения активности каталазы?

 

Лабораторная работа № 31