ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ. В методе тонкослойной хроматографии (ТСХ) неподвижная твердая фаза тонким слоем наносится на пластинку из стеклаВ методе тонкослойной хроматографии (ТСХ) неподвижная твердая фаза тонким слоем наносится на пластинку из стекла, алюминиевой фольги или полиэфирной пленки. В качестве сорбента в ТСХ применяют силикагели, оксид алюминия, крахмал, целлюлозу и другие вещества с высокой адсорбционной способностью. Выбор растворителя зависит от природы сорбента и свойств анализируемых соединений. Часто применяют смеси растворителей из двух или трех компонентов. При нанесении сорбента в виде водного раствора при комнатной температуре частицы сорбента остаются покрытыми тонкой пленкой воды. Разделяемые вещества затем распределяются между подвижным растворителем и фиксированной неподвижной водной фазой согласно их растворимости. При этом ТСХ является разновидностью распределительной хроматографии. После сушки сорбента нагреванием тонкая пленка воды исчезает и разделяемые вещества распределяются между подвижным растворителем и твердым неподвижным сорбентом согласно их адсорбционной способности. При этом ТСХ является разновидностью молекулярно-адсорбционной хроматографии. Пробу анализируемой жидкости в виде пятна или полосы наносят на стартовую линию в 2-3 см от края пластинки. Нанесение пробы осуществляют микропипетками, микрошприцами или специальными приспособлениями. Край пластинки погружают в растворитель (или систему растворителей), который действует как подвижная фаза. Под действием капиллярных сил растворитель движется вдоль слоя сорбента и с разной скоростью переносит компоненты смеси, что приводит к их разделению. Стандартное вещество ("свидетель") в том же растворителе, что и анализируемая проба, наносится на стартовую линию (рис. 2) и, таким образом, хроматографируется в тех же условиях. Влияние различных факторов на все вещества будет одинаковым. Для полученных пятен (зон) веществ на хроматограмме рассчитывают индекс удерживания R по формуле (4). Учитывая, что время перемещения всех веществ и растворителя одинаково, формула (4) приобретает следующий вид: R = L вещества / L растворителя, (3)
где L вещества - это путь, пройденный веществом, L растворителя - это путь, пройденный растворителем. Совпадение индекса удерживания R компонента смеси и одного из "свидетелей" дает основание для отождествления вещества с учетом возможных наложений. Несовпадение R интерпретируется более однозначно: оно указывает на отсутствие в пробе соответствующего вещества (рис.2). По окончании хроматографирования хроматограмму высушивают и проявляют химическим или физическим способом. При химическом способе пластинку опрыскивают раствором реактива, взаимодействующего с компонентами смеси. При обработке, например, парами йода четко проявляются органические соединения. В физических способах проявления используется способность некоторых веществ флуоресцировать под действием ультрафиолетового излучения. Вещества, обладающие радиоактивным излучением, обнаруживаются методом радиоавтографии с помощью различных фотоматериалов. Количественные определения в ТСХ могут быть сделаны или непосредственно на пластинке, или после удаления вещества с пластинки. При непосредственном определении на пластинке измеряют тем или иным методом площадь пятна (например, с помощью миллиметровой кальки) и по заранее построенному градуированному графику находят количество вещества. Применяют также прямое спектрофотометрирование пластинки с помощью спектроденситометров. Наиболее точным считается метод, в котором вещество после разделения удаляется с пластинки и анализируется спектрофотометрическим или иным методом.
|
