Исследуемые биомедицинские параметры и их диапазонДля проведения метода используют специальные приборы – хроматографы, которые имеют 3 основных узла: хроматографическая колонка, детектор и устройство для ввода пробы. После ввода пробы в хроматограф под действием потока подвижной фазы компоненты смеси начинают перемещаться вдоль колонки, заполненной сорбентом, с различными скоростями, величины которых обратно пропорциональны коэффициенту распределения компонентов. То есть хорошо сорбируемые компоненты передвигаются вдоль слоя сорбента медленнее, чем плохо сорбируемые, поэтому первым из колонки выходит компонент с наименьшим коэффициентом распределения, затем с более высоким и т.д. Сигнал детектора автоматически записывается и регистрируется (обычно на диаграммной ленте самописцем) в виде графика, отражающего расположение хроматографических зон на слое сорбента или в потоке подвижной фазы во времени (рис 2).
Рисунок 2- расположение хроматографических зон. Идентификацию пиков неизвестных компонентов анализируемой смеси проводят путем сравнения относительных величин, определяемых непосредственно из хроматограммы, с соответствующими табличными данными для известных соединений. При идентификации в X. достоверен только отрицательный ответ. Например, пик i не является веществом А, если времена удерживания пика i и вещества А не совпадают. Совпадение времен удерживания пика i и вещества А – необходимое, но недостаточное условие для заключения, что пик i - это вещество А. Для идентификации веществ Х. может использоваться в сочетании с другими физико-химическими и физическими методами, например с масс-спектрометрией, ИК-, УФ-спектроскопией и др. Для количественного анализа определяют высоты или площади хроматографических пиков с учётом коэффициентов чувствительности используемого детектирующего устройства к анализируемым веществам. СОРБЕНТ - твердое вещество, жидкость или их смеси, способные поглощать или удерживать газы, пары или растворенные вещества и используемые в хроматографии в качестве неподвижной фазы. АДСОРБЕНТ - твердый сорбент, концентрирующий на своей поверхности газы, пары или растворенные вещества. Адсорбентом заполнена хроматографическая колонка, в которой, в свою очередь, происходит разделение смеси веществ на отдельные компоненты. СОРБАТ - компонент анализируемой смеси, внесенной в хроматографическую колонку. ЭЛЮЕНТ - растворитель или смесь растворителей, предназначенная для прокачки анализируемой смеси через хроматографическую колонку (подвижная фаза). ЭЛЮАТ - раствор, выходящий из хроматографической колонки.
|
