Лабораторные исследования со слюной (ротовой жидкостью).

Методы сбора слюны.

Слюну без стимуляции у человека можно со­бирать в разное время суток. При любом способе получения смешанной слюны, если измеряется скорость ее секреции, испытуемый не должен про­глатывать слюну. Скорость секреции определяется в мл/мин. Часто слюну собирают спустя 1-2 часа после приема пищи в отсутствии действия дополнительных раздражителей. Обследуемому предлагают наклонить подбородок вниз к груди, и слюна стекает в при­ставленную к нижней губе градуированную центрифужную пробирку. Используется и стимуляция с по­мощью активных движений языка и жевательной мускулатуры щек с по­следующим сплевыванием в пробирку.

Стимулирование секреции, слюны вызывают различными средствами (пищевыми или механическими раздражителями). При этом можно получить большое количество слюны за короткий промежуток времени. Применение пищевых раз­дражителей и кислот имеет тот недостаток, что они примешиваются к слюне, меняя ее некоторые химические и физико-химические показатели. Для получения слюны без примеси раздражителя используют механические раздражители (жевание парафина, резины и др.), которые удобны в связи с легкостью отделения от них слюны. Также можно исполь­зовать и термическое воздействие (холодный раствор на заднюю половину
языка). Сбор слюны за определенное время дает возможность опреде­лить скорость ее тока (мл/мин), что важно при анализе многих пока­зателей.

Для изучения влияния слюны на состояние органов полости рта и процессы, происходящие в ней, не является достаточным исследование только слюны покоя и стимулированной слюны. Как интенсивное стимулирование, так и состояние полного покоя явля­ются лишь периодами в функционировании слюнных желез. Состав и свойства слюны в эти периоды не могут характеризовать многообразие изменений этой жидкости, обусловленных многими факторами, составля­ющими во времени гораздо большую часть, чем изучаемые промежутки времени. Кроме того, степень стимулирования и покоя зависит от реак­тивности организма обследуемого, силы применяемого раздражителя, ко­торые трудно учесть при изучении только стимулированной или нестиму­лированной слюны. Поэтому исследование слюны покоя и стимулирован­ной слюны необходимо проводить при различных функци­ональных состояниях желез, а также в сравнительном аспекте.

1. Качественная реакция на амилазу слюны.

Ход работы: на предметное стекло нанести 1 каплю 1% раствора крахмала и 1 каплю слюны. Слюну предварительно развести водой в соотношении 1:1 в отдельной пробирке. Через 5 минут добавить 1 каплю раствора Люголя. Оценить развившуюся окраску.

1. Определение рН слюны. Каплю слюны поместить на универсальную индикаторную бумагу. Сравнить полученную окраску со шкалой. Слюна в норме имеет рН близкое к нейтральной (6,8-7,2). Сдвиг рН в кислую сторону нарушает процессы минерализации и способствует развитию кариеса. При этом также создаются условия для воздействия кислых протеиназ на ткани пародонта. Сдвиг рН в щелочную сторону может сопровождаться образованием зубного камня.
2. Определение буферной емкости слюны. Кислую и основную емкость слюны можно определить по методу В.К.Леонтьева (1974).

Ход определения: предварительно измеряют рН слюны с помощью рН-метра. Затем в к 1 мл слюны добавляют 1 мл 0,01 N раствора HCl и вновь измеряют рН. Параллельно к такому же объему слюны добавляют 1 мл 0,01 N раствора NaOH и также измеряют рН. Расчет производят по формуле:

B= 10/(рН₀ – рН₁) * V, где В – буферная емкость 1 л слюны (в мг-экв кислоты или щелочи); 10 – коэффициент пересчета на 1 л слюны; рН₀ – рН₁ – разница в единицах рН до и после прибавления кислоты или щелочи; V – количество (мл) слюня взятой для анализа.

1. Обнаружение в слюне роданидов. Роданиды слюны можно обнаружить по появлению красной окраски после добавления к слюне хлорного железа. Окрашивание вызвано образованием комплексного соединения, содержащего железо и роданид. Ход определения: к 5 каплям цельной слюны добавить 2 капли 2% раствора соляной кислоты и 2 капли 0,01% раствора хлорного железа. Развивается красное окрашивание.

Содержание роданидов выше в слюне у курильщиков. Это обусловлено избыточным поступлением в их организм синильной кислоты в составе табачного дыма. Цианиды под действием фермента роданазы (тиосульфатсульфидтрансферазы) превращаются в тканях в роданиды, которые выводятся из организма в составе слюны.