Определение фекального трипсина и химотрипсина

Методику применяют в качестве непрямого теста оценки внешнесекре-торной функции ПЖ в течение многих лет. Тест может использоваться в качестве скрининг-теста при ХП. В. J. Haverback и соавт. [215] первыми описали его как диагностический тест; позднее его оценка была дана R. W. Amman и соавт. [88].

Трипсин и химотрипсин измеряются в образцах кала без подготовки больного. Измерение основывается на использовании в качестве субстра­тов 1Ч-ацетил-Ь-тирозинэтилового эфира (АТЭЭ) и р-толуэнсульфонил-L-аргининметилового эфира (ТАМЭ) для химотрипсина и трипсина соответ­ственно. Существуют указания, что проведение анализа не из разовой пор­ции, а из суточного количества кала значительно улучшает результаты ис­следования, но одновременно и сильно затрудняет обследование [415]. Ка­ловую суспензию получают при смешивании 3—5 г кала с достаточным объемом изотонического солевого раствора до разведения 1:10. Суспензию гомогенизируют и фильтруют через двойной слой марли.

Активность химотрипсина. Образец каловой суспензии (0,05—1,0 мл) разводят до объема 4 мл трисбуфером [0,005 М трис-(гидроксиметил)-ами-нометан], содержащим 0,5 М NaCl, 0,005 М СаС1₂; добавляют 2,5 мл рас­твора АТЭЭ и доводят рН до 7,8 с помощью 0,1 N НС1. Все измерения проводятся при 25°С и рН 7,8 путем титрования свободных кислот 0,01 — 0,0025 N NaON (это легче всего достигается с помощью автоматического титратора рН). Активность химотрипсина регистрируется в миллиэквива-лентах титранта, выданного за единицу времени для поддержания посто­янного рН, и переводится в микрограммы кристаллического химотрипсина с помощью стандартной кривой.

Определение трипсина осуществляется аналогичным методом: 0,05—1,0 мл каловой суспензии разводят трисбуфером, содержащим 0,04 М NaCl и 0,02 М СаС1₂ до конечного объема 5,26 мл; добавляют 1,24 мл раствора ТАМЭ и доводят рН до 8,2. Титрование производится так же, как это опи­сано для химотрипсина.

По данным R. W. Amman и соавт. [88], ферментативная активность в образцах кала при комнатной температуре остается без изменений до 7 дней; однако, рекомендуется его хранение при 4°С. Изменение фермен­тативной активности наблюдается после гомогенизации образцов, а также при их замораживании.

По данным В. J. Haverback и соавт. [215], нижняя граница нормы для концентрации химотрипсина в кале составляет 74 мкг/г. R. W. Amman и соавт. [88] полагают, что определение нижней границы в пределах 120 мкг/ г позволит повысить чувствительность теста, правда, с некоторым сниже­нием его специфичности. Нижняя граница нормальной активности трип­сина лежит в пределах 20—30 мкг/г в зависимости от необходимой степени чувствительности и специфичности.

По данным R. W. Amman и соавт., при использовании указанных выше значений нормы определение химотрипсина в кале дает 10 % ложноотри-цательных и 13 % ложноположительных результатов [88]. При измерении фекального трипсина эти показатели выше. В последующих работах отме­чалось, что определение содержания трипсина в кале ненадежно, посколь­ку он частично разрушается при транзите по кишечнику [5]. В более позд-

Глава 5. Диагностика панкреатитов • 267

них работах R. W. Amman и соавт. [89] указывают, что измерение фекаль­ного химотрипсина является весьма полезным тестом при стеаторее.

В настоящее время считается, что чувствительность теста составляет 70—90 %, диагностическая точность превышает 85 % у больных ХП с вы­раженной экзокринной недостаточностью ПЖ, однако при легких формах экзокринной недостаточности имеет значительно меньшую диагностиче­скую ценность — порядка 49 % [49]. Специфичность теста составляет 50— 80 %. Ложноположительные результаты отмечаются при циррозе печени, гепатите, целиакии, болезни Крона, диарее различного генеза, после ре­зекции желудка [415].