Косвенные методы определения соматических клеток

Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагности­ческих реактивов мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разруша­ют мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы, определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы для диагностики субклинического мастита и пробах сборного молока для определения в нем примеси анормального.

Для диагностики мастита по молоку из каждой доли вымени используют диагностические реактивы малой концентрации: мастидин 2%, димастин 5%, мастоприм I%, в пробе Уайт-Сайда 4% раствор едкого натра.

Для диагностики мастита у коров по молоку разового или суточного удоя используют 10% раствор димастидина и 20% димастина, а для определения примеси анормального молока в сборном - 2,5% раствор мастоприма и маститодиагност (реактив Загаевского).

Наличие в составе мастидина, кроме ПАВ, индикатора бромкрезолпурина, а в димастине фенолового красного, позволяет судить по изменению цвета смеси о величине рН исследуемого молока.

При использовании этих реактивов для диагностики субклини­ческого мастита основным диагностическим признаком является обра­зование желеобразного сгустка, а изменение цвета смеси – ориентирующим.

 

Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды.

В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-ав­томата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемеши­вают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 с. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения плас­тинки в горизонтальной плоскости.

Реакцию учитывают по густоте желе:

отрицательная реакция (-) - однородная жидкость:

сомнительная реакция (±) - следы образования желе;

положительная реакция (+) - ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.

На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь. При сомнительной реакции (±) во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка. Положительная реакция (+) - отчетливое появ­ление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концент­рирующегося при вращении пластинки в центре луночки.

Определение рН молока по цвету:

светло-сиреневый, дымчатый - рН молока нормальная (6,5-6,8);

почти белый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);

темно-сиреневый - повышенная щелочность молока (рН больше 8).

Проба с 5% раствором димастина. Раствор димастина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Определения рН молока по цвету:

оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) – нормальная реакция молока (рН 6,5-6,8);

желтый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);

красный - повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);

алый и малиновый - ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7,0).

Проба с I% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натром (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводяткакпри исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Проба с 10% раствором мастидина. Диагностику мастита у коров по молоку разового или суточного удоя проводят при контрольных дойках и взятии проб для определе­ния жира и других показателей молока. Молоко в количестве 1 мл берут из молокомера или суточной пробы и выливают в луночку молочно-контрольной пластинки. Затем добавляют 1 мл 10 % раствора мастидина.

Техника постановки пробы на пластинках ПМК-1 и ПМК-2 и учет реакции по образованию желе и цвету проводят как указано раньше.

Для определения пораженной доли вымени от животных, давших положительную и сомнительную реакцию с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 2% раство­ром мастидина, или 5% раствором димастина, или 1% раствором мастоприма, или пробой Уайтсайда.

Проба с 20% растворам димастина. Постановку пробы и учет реакции проводят как с 5% раствором.

Соответствие количества соматических клеток (млн./мл), подс­читанных по методу Прэскотта-Брида, показаниям реакции молока из долей вымени коров с 2% раствором мастидина и 5% раствором димас­тина по данным А.И.Ивашуры, представлены в таблице:

Соответствие количества соматических клеток показаниям реакции молока

 

Реактив	Реакция с реактивом; количество СК
-	+/-	+
Мастидин		1168248 -3752443	6987531 -21179849
Димастин		1656400 -4759550	9279290 -27936675

 

Проба с 2,5% раствором мастоприма. Примесь анормального молока в сборном определяют на молокоперерабатывающих предприятиях.

В луночки молочно-контрольной пластинки ПМК-1 вносят 1млтщательно перемешанного молока и добавляют к нему 1 мл 2,5% раст­вора мастоприма. Молоко с реактивом перемешивают в течение 10 -15 с и учитывают реакцию.

На пластинке ПМК-1 при отрицательной реакции жидкость одно­родная, желе не образуется. Такое молоко не имеет примеси анор­мального молока или примесь незначительная (2-З%).

Положительная реакция - образуется желеобразный сгусток, степень которого оценивается в крестах.

Один крест (+) - слабое желе, смесь молока с реактивом тя­нется за палочкой в виде нити, на дне уже заметна небольшая выем­ка. Такое молоко содержит в среднем 4-б% анормального молока и до 500 тыс./мл соматических клеток. Два креста (++) - более выраженный желеобразный сгусток, при перемешивании которого хорошо видна выемка, но желе из луночки еще не удается выбросить. Такое молоко содержит в среднем 9-10% анормального молока и от 500 тыс. до 1 млн./мл соматических кле­ток.

Три креста (+++) - хорошо сформированный желеобразный сгусток, который легко можно выбросить палочкой из луночки пластинки. Такое молоко содержит выше 15% анормального молока и свыше 1 млн./мл соматических клеток.

Проба с маститодиагностом (реактив Загаевского). Для приготовления маститодиагноста 300 г сульфанола и 50 г триполифосфата натрия растворяют в 1 л дистиллированной воды при температуре 70-75°С. После полного растворения смеси и охлажде­ния до 20-25°С добавляют 0,2 г бромтимолового синего и 3 мл 1% спиртово-водного раствора розоловой кислоты и тщательно перемеши­вают в течение 3-5 мин, после чего реактив фильтруют через ватный фильтр.

Срок хранения приготовленного реактива - 3-3,5 месяца при температуре 5°С. Для исследования берут 2 мл тщательно перемешанного сборного молока, вносят в луночку молочно-контрольной пластинки ПМК-1, до­бавляют 1 мл маститодиагноста и перемешивают палочкой в течение 5-10 с.

Учет реакции проводят по изменению консистенции и цвета сме­си молока с реактивом. Гомогенная смесь молока с реактивом (-) - отсутствие примеси анормального молока в сборном. Наличие единичных слизистых тяжей и хлопьев (±) - примесь анормального молока 1-5%. Умеренное содержание жидкой слизи и хлопьев(+) - примесьанормального молока 5-10%. Наличие слизи жидкой консистенции (++) - примесь анормально­го молока 10-15%. Умеренный сгусток в виде белка куриного яйца (+++) - примесь анормального молока 20-25%. Плотный желеобразный сгусток, зеленоватого цвета (++++)-примесь анормального молока свыше 25%.

Примесь более 10% анормального молока к сборному влияет на его технологическую переработку, качество изготовляемых из него кисломолочных продуктов и сыров.