Исследований. При исследовании микрофлоры почвенных горизонтов делают почвенный разрез

При исследовании микрофлоры почвенных горизонтов делают почвенный разрез. Перед взятием проб снимают поверхностный слой почвы на глубину 1 см. Пробы берут чистым инструментом по слоям и горизонтам почвы. Инструменты можно не стерилизовать, но они должны быть чистыми и перед взятием пробы протерты почвой соответствующего горизонта.

При других почвенно-микробиологических исследованиях берут смешанные пробы. Смешанная проба составляется из индивидуальных образцов (до 0, 5 кг), взятых цилиндрическим буром, не меньше, чем с пяти точек поля по одной или двум диагоналям. Чем больше площадь поля, тем больше надо брать индивидуальных проб. Размер индивидуальных образцов должен быть примерно одинаковым. На чистой клеенке или листе бумаги их смешивают и берут среднюю пробу весом 0, 5–1, 0 кг. Пробы помещают либо в стерильную банку с крышкой, либо в стерильный пергаментный мешок или полиэтиленовый пакет. Для каждой пробы пишут простым карандашом подробную этикетку, в которой обозначают дату взятия образца, точное название поля, горизонт, с которого взята проба, отмечают особенности выбранного участка (рельеф, растительность, агротехнический фон). До анализа и между определениями, пробы хранят в холодильнике.

2.2 Подготовка почвенного образца к микробиологическому анализу

Хорошо перемешанную почву высыпают на сухое стекло, протертое спиртом и обожженное пламенем горелки. Почву тщательно перемешивают шпателем и раскладывают ровным слоем. Пользуясь пинцетом, удаляют корешки и другие посторонние включения. Непосредственно перед работой шпатель и пинцет стерилизуют прокаливанием на пламени спиртовки, остужают. Из разных мест распределенной на стекле почвы шпателем отбирают небольшие порции и в стерильной, предварительно тарированной фарфоровой чашке взвешивают на технических весах 1 г среднего образца.

Для разрушения почвенных агрегатов и десорбции клеток микроорганизмов с почвенных частиц пробу подвергают специальной обработке. Заранее готовят две стерильные колбы емкостью до 250 мл: одну со 100 мл стерильной водопроводной воды, другую оставляют пустой. Берут из первой колбы 0, 4–0, 8 мл воды, увлажняют ею навеску почвы в фарфоровой чашке до пастообразного состояния и смесь растирают 5 мин стерильным пестиком. Водой из первой колбы переносят растертую почвенную массу в пустую колбу, используя для этого весь объем воды. Почву растирают и переносят в колбу около пламени горелки (следует учесть, что все операции проводят быстро, вблизи пламени спиртовки). Колбу с почвенной суспензией встряхивают на качалке в течение 5 мин (либо выполняют эту операцию энергично вручную). После этого суспензии дают отстояться 30 с, чтобы осели крупные частицы, и тотчас же используют ее для приготовления разведений. При этом учитывают, что в полученной исходной суспензии исследуемый материал разведен в 100 раз (1: 10²).

Приготовление разведений. Разведения делают в стерильном 0, 5%-ном водном растворе NaCl. Заранее готовят определенный объем этого раствора (около 100 мл) и стерилизуют его при 1 атм. Чаще всего делают десятичные разведения (рисунок 11.1).

Рисунок 11.1 – Схема приготовления разведений и посева

суспензии микроорганизмов шпателем

Для этого стерильный раствор NaCl разливают стерильной пипеткой по 4, 5 мл в стерильные пробирки. Затем переносят стерильной пипеткой 0, 5 мл исходной суспензии (1: 10²), получают разведение 1: 10³ . Суспензию этого разведения тщательно перемешивают с помощью новой стерильной пипетки, вбирая в пипетку и выпуская из нее полученную взвесь. Эту процедуру повторяют до 5 раз. Затем этой же пипеткой берут 0, 5 мл полученного разведения и переносят его во вторую пробирку – это разведение 1: 10⁴. Таким образом готовят и последующие разведения: 1: 10⁵, 1: 10⁶, 1: 10⁷, 1: 10⁸, 1: 10⁹, 1: 10¹⁰. Для приготовления каждого разведения обязательно используют отдельную пипетку. Пренебрежение этим правилом может привести к искажению результатов в 100 и более раз.

Полученные после разведения суспензии микроорганизмов используют для определения количества микроорганизмов путем высева на различные питательные среды и/или для учета численности микроорганизмов методом прямой микроскопии, а также для изучения качественного состава и морфологии микроорганизмов микроскопическими методами.