Опыт 6. Количественное определение креатинина в моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера)Креатинин, взаимодействуя с хиноидной формой пикриновой кислоты, образует пикрат креатинина, который в щелочной среде превращается в свою таутомерную форму, имеющую оранжево-красный цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации креатинина.
В мерную колбу на 100 мл отмеряют из суточного количества 0, 5 мл мочи и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Встряхивают и добавляют 0, 2 мл 10% раствора гидроксида натрия. На 10 минут оставляют при комнатной температуре, после чего дистиллированной водой доводят объем до 100 мл. Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) против контроля. Одновременно ставят контрольную пробу. В мерной колбе на 100 мл смешивают 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты и 0, 2 мл 10% раствора гидроксида натрия, доводят водой до метки. Стандартная проба. В мерную колбу на 100 мл наливают 0, 5 мл основного стандартного раствора креатинина и 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Встряхивают и прибавляют 0, 2 мл 10% раствора гидроксида натрия. Далее пробы обрабатывают так же, как и опыт. Расчет производят по формуле:
где х - количество креатинина в суточной моче, мг; Сст - количество креатинина в стандартной пробе, мг; Dоп — оптическая плотность опытной пробы; Dст - оптическая плотность стандартной пробы; Vсут - суточное количество мочи; V - количество мочи, взятой для анализа. Полученные данные сопоставить с нормальными величинами содержания креатинина в суточной моче. В норме содержание креатинина в моче у мужчин равно 1-2 г/сут (8, 8-17, 7 ммоль/сут), у женщин - 0, 8-1, 8 г/сут (7, 1-15, 9 ммоль/сут). Контрольные вопросы 1. В каком виде аммиак и аминный азот попадают из периферических тканей в печень для образования мочевины? 2. Дефект какого из ферментов орнитинового цикла может быть причиной увеличения суточной экскреция аргининосукцината? 3. Почему при поражениях печени наблюдается аминоацидурия? 4. Приведите уравнения нейтрализации ацетоуксусной и b-гидроксимасляной кислот аммиаком.
|
,
