Добавьте в каждую пробирку цветной индикатор (Enzyme Color Reagent)

8. Нажмите «Incubate» для начала инкубации содержимого пробирок.

9. Открыть шторку спектрофотометра справа – нажмите «Set Up».

10. Переместите первую пробирку в держатель спектрофотометра и нажмите кнопку «Analise». На экране появится красная точка, показывающая концентрацию глюкозы в первой пробирке. Зарегистрируйте результат в таблице, нажав Record Data

11. Перенесите пробирку из спектрофотометра в контейнер для тары слева (Test Tube Washer).

12. Повторите измерения концентрации раствора в остальных пробирках. Не забывайте после окончания каждого измерения выбрасывать пробирку в контейнер и нажимать «Record Data».

13. Запишите результаты в протокол и постройте калибровочную кривую, нажав кнопку «Graph» под экраном спектрофотометра

Часть 2.

В верней части экрана выбираем Experiment и затем Insulin and diabetes – Part II. Появится оборудование для измерения концентрации глюкозы в крови. В этой модели, кроме спектрофотометра, контейнера для пробирок и штатива, имеются клетки с экспериментальными животными и шприцы с различными веществами (инсулин, физраствор, аллоксан), которые Вы будете вводить крысам.

Рисунок 33. Оборудование для измерения концентрации глюкозы в крови.

Программа «Инсулин и диабет. Часть 2.

Алгоритм действий:

1. Выберите с помощью мышки шприц с физиологическим раствором (Saline) и сделайте инъекцию контрольной крысе. Заберите пробирку из контейнера и перенесите ее к основанию хвоста контрольного животного для забора крови. Затем пометите пробирку с кровью в первую лунку штатива.

2. Выберите с помощью мышки шприц с аллоксаном (Alloxan), который блокирует выделение инсулина бета-клетками поджелудочной железы, и сделайте инъекцию экспериментальной крысе. Заберите пробирку из контейнера и перенесите ее к основанию хвоста экспериментального животного для забора крови. Затем пометите пробирку с кровью во вторую лунку штатива.

3. Сделайте инъекции инсулина (Insulin) обеим крысам и заберите их кровь так же, как и раньше. Пробирки с кровью пометите в 3-ю (контроль) и 4-ю (опыт) лунки штатива.

4. Нажмите (Obtain reagents) для перехода к процедуре анализа. Клетки с животными исчезнут, вместо них появятся необходимые растворы.

5. Добавьте в каждую пробирку дистиллированную воду (Deionized wather), гидроксид бария (Barium hydroxide) и гепарин (Heparin).

6. Нажмите Mix для перемешивания раствора в пробирках.

7. Нажмите Centrifuge для центрифугирования содержимого пробирок.

8. Нажмите Remuve Pellet для удаления осадка.

9. Добавьте цветного индикатора (Enzyme Color Reagent)

10. Нажмите Incubate для начала инкубации содержимого пробирок.

11. Открыть шторку спектрофотометра справа – нажмите Set Up.

12. Нажмите «Graph Glucose Standard» под экраном спектрофотометра для появления калибровочной кривой.

13. Переместите первую пробирку в держатель спектрофотометра и нажмите кнопку «Analise». На экране появится горизонтальная линия, показывающая показатель экстинции прибора. С помощью мышки переместите вертикальную линию в точку пересечения горизонтали с калибровочной кривой. Эта точка соответствует концентрации глюкозы в первой пробирке. Зарегистрируйте результат в таблице, нажав Record Data

14. Перенесите пробирку из спектрофотометра в контейнер для тары слева (Test Tube Washer).

15. Повторите измерения концентрации раствора в остальных пробирках (как в пункте 13). Не забывайте после окончания каждого измерения выбрасывать пробирку в контейнер и нажимать Record Data.

16. Запишите результаты в протокол и сделайте выводы.

Таблица 3. Влияние инсулина на концентрацию глюкозы в крови.

Пробирка №	Показатель экстинции (Optical Density)	Концентрация глюкозы (мг/децилитр	Инсулин	Физраствор	Аллоксан

 

Попробуйте ответить на следующие вопросы:

1. Чем отличается реакция на инсулин у контрольного и большого диабетом животного?

2. Каков механизм действия инсулина?

 

 

МОЧЕОБРАЗОВАНИЕ