Ра лет была синтезирована полная последовательность ДНК-копии интер-ферона, способная кодировать α1-интерферон. Синтез олигонуклеотидов Был осуществлен новым методом, существенно ускорившим синтез гена. Вначале к полиакриламидной смоле был присоединен нуклеотид; далее Проводили присоединение пар нуклеотидов, используя конденсирующий Агент в безводном пиридине. Каждый цикл длился полтора часа, поэтому В течение года можно было синтезировать последовательность длиной в Нуклеотидов. Было синтезировано 67 олигонуклеотидов, которые с Помощью лигазы соединили в двунитевую ДНК, состоящую из 514 пар нуклеотидов. Полученный ген встраивали в клетки двух бактерий: E. coli, Methylophilus methylotrophus, и была получена экспрессия. Усилия, направленные на получение генноинженерных интерферонов, По сравнению с методом культуры клеток позволили снизить затраты бо- Лее чем в 100 раз. Были получены различные типы интерферонов на осно- Ве генноинженерных клеток бактерий и дрожжей. Это позволило развер- Нуть медико-биологические и клинические испытания препаратов. Полу- чаемые в течение 1980–1981 гг. препараты интерферонов были очищены на 80 % и обладали удельной активностью более 107 международных еди- Ниц на 1 мг белка. Расширение клинических испытаний интерферонов, Начатых в этот период, зависит от повышения степени его очистки. Про-
|
