Идентификацию (скрининг) и отбор клеток, которые приобрели же-Лаемый ген или гены. ДНК ДНК 5’ 3’ 5’ G 3’ G G G A A A A A A T T T T T T C C C C Эндонуклеаза Эндонуклеаза Расщепленная Плазмида Рекомбинантная Плазмида Введение Рекомбинантной Плазмиды В кишечную Палочку Плазмида Чужеродный ген (ДНК) Клонирование гена Лигаза Плазмиды Хромосома A A T T С С С С T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T A A A A A A A A A A A A A A A A AA AA A A A A G G T T T T A A A A + Рис. 4.1. Введение гена в плазмиду E. coli и клонирование рекомбинантной ДНК в клетках (по А. Сассону, 1987). Плазмида E.coli расщепляется рестриктазой в обеих частях ДНК с образованием на концах неспаренных Нуклеотидов (ТТАА или ААТТ). Ген выщеплен с помощью этой же рестриктазы с образованием на концах, Комплиментарных плазмиде, последовательностей (ААТТ и ТТАА). Обе ДНК (гена и плазмиды) сшивают с Помощью лигазы. Гибридную плазмиду вводят в E. coli, которая при размножении образует клон, все клет- Ки которого содержат рекомбинантную плазмиду и чужеродный ген. Ген клонирован в бактериальной Клетке и индуцирует в ней синтез белка. Получение генов Получение генов возможно несколькими путями: выделением из ДНК, Химико-ферментным синтезом и ферментным синтезом. Выделение генов из ДНК проводят с помощью рестриктаз, катализи-
|
