Занятие № 25

 

ТЕМА. БИОСИНТЕЗ ЛИПИДОВ И ХОЛЕСТЕРИНА. РЕГУЛЯ-ЦИЯ И НАРУШЕНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА.

 

Цель занятия: 1.Изучить обмен холестерина у человека.

2.Усвоить синтез триглицеридов и фосфоглицеридов.

3.Ознакомиться с регуляцией и патологией липидного обмена.

4.Овладеть методом количественного определения холестерина в сыворотке крови (по Ильку).

Исходный уровень знаний:

- строение и классификация липидов;

- регуляция активности ферментов;

- строение ц-АМФ, АТФ, ЦТФ;

- жирорастворимые витамины.

Содержание занятия.

I.2. Синтез и ресинтез триглицеридов.

Пути синтеза и ресинтез глицерофосфолипидов.

Синтез холестерина: локализация в организме, этапы, химизм I стадии.

Биологическое значение и структура стероидов - производных холестерина.

Выведение холестерина из организма.

Липопротеиды: виды, состав.

Регуляция липидного обмена: роль ЦНС, эндокринной системы, ц-АМФ.

Патология липидного обмена: причины, симптоматика, примеры энзимопатий.

 

II.1. Работа № 1. РЕАКЦИЯ ЛИБЕРМАННА-БУРХАРДТА

НА ХОЛЕСТЕРИН.

Холестерин и его эфиры содержатся в различных тканях и жидкостях животных: головном мозге, кожном сале, крови, желчи. В мозге холестерин в норме присутствует почти исключительно в свободном виде, а не в виде эфиров. В белом веществе мозга содержится 4-5% холестерина на влажную массу.

Принцип метода.

Раствор холестерина в хлороформе дает с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой красное окрашивание, переходящее затем в синее и зеленое. Под действием концентрированной серной кислоты происходит отщепление воды от вторичного спирта холестерина с последующей конденсацией непредельных углеводородов, соединяющихся с серной кислотой, и образованием окрашенных продуктов.

 

Порядок выполнения работы.

К 1 мл хлороформного экстракта из мозга добавить 10 кап уксусного ангидрида и 2 кап. концентрированной H₂SO₄ и хорошо перемешать. Отметить изменение окраски.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕ-РИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода.

Холестерин взаимодействует с ацетангидридом и серной кислотой с образованием соединения зеленого цвета. Интерференция белков подавлена 2,5-диметилбензосульфоновой кислотой.

Порядок выполнения работы.

Реактивы (мл)	Р-р сравнения	Эталон	Проба
Сыворотка крови	-	-	0,1
Стандартный –р (реактив 1)	-	0,1	-
Дистиллированная вода	0,1	-	-
Реактив 2	3,0	3,0	3,0
	Перемешать, на водяную баню t=20оС на 5 мин.
Реактив 3 (Н2SO4)	0,6	0,6	0,6
	Быстро перемешать, на водяную баню t=20оС на 10 мин.

 

Измерить оптическую плотность пробы и эталона против раствора сравнения в кювете 1 см при длине волны 560-590 нм.

РАСЧЕТ:

А₁

Х =, где

А₂

 

Х - количество холестерина в ммоль/л

А₁ – оптическая плотность пробы

А₂ – оптическая плотность стандарта.

 

РЕЗУЛЬТАТ:

 

ВЫВОД:

 

Клинико-диагностическое значение.

При нарушении жирового обмена холестерин может накапливаться в крови. Увеличение содержания холестерина в крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, механической желтухе, нефрите, нефрозе (особенно при липоидных нефрозах), гипотиреозе.

Понижение холестерина в крови (гипохолестеринемия) наблюдается при анемиях, голодании, туберкулезе, гипертиреозе, раковой кахексии, паренхиматозной желтухе, поражении центральной нервной системы, лихорадочных состояниях, при введении инсулина.

 

III.2. Контрольные вопросы.

В каком виде холестерин содержится в сыворотке крови и тканях?

В чём заключается физиологическое значение холестерина?

Какова нормальная концентрация холестерина в сыворотке крови?

При какой патологии наблюдается гиперхолестеринемия?

Когданаблюдается гипохолестеринемия?

Назовите исходные вещества для синтеза холестерина.

Предшественником каких биологически активных соединений является холестерин?

 

Материал для самоподготовки. а)1 с.392-408, 556-558, 574-577,

245, 454; II, III