Цель занятия:отработать методику микробиологической диагностики инфекций, вызываемых псевдомонадами.

КОММЕРЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ

Уважаемые господа!

Предлагаем Вашему вниманию площади в аренду для организации отдела по реализации следующих товаров: косметика, парфюмерия, бытовая химия, расходные материалы для салонов красоты и других сопутствующих товаров в Торгово-сервисном центре «Курья».

Место расположения: г. Пермь, В. Курья, 5-ая Линия, д. 1 в.

 

 

Конкурентные преимущества:

• место расположения – объект расположен в самом центре микрорайона, на пересечении основных транспортных магистралей, недалеко от города, в сосновом бору, не берегу реки.

Метраж площадей:

• от 15 кв.м.

Характеристики здания:

• Площадь застроенного участка 1 252,4 м2

• Площадь земельного участка 2 585, 0 м2

• Общая площадь здания 3 504,6 м2

• Количество этажей здания 3 этажа

• Высота 1-го и 2-го этажей 3,3 м

• Высота 3-го этажа 4,2 м

• Автостоянка 33 м/места

Стоимость: В связи со срочностью открытия данного направления готовы учесть пожелания потенциального Арендатора. Гарантируем индивидуальный подход к каждому клиенту.

С уважением, Директор ТЦ «Курья» Хохлова Елена Ильинична. 293-80-37, 8902-47-180-37.

Директор по развитию Кучумова Анжела Алексеевна 8963-858-64-37.

Тема: «Микробиологическая диагностика инфекций вызываемых псевдомонадами».

Цель занятия:отработать методику микробиологической диагностики инфекций, вызываемых псевдомонадами.

Самостоятельная работа:

1. Посев исследуемого материала на МПА и селективные среды – среды с нитрофуранами или ЧАО

2. Изучение культуральных свойствPseudomonas aeruginoza (описание колоний,

пигментообразование, запах)

3. Постановка тестов на оксидазу и каталазу

4. Приготовление мазков из подозрительных колоний, окраска по Граму, микроскопия

5. Отсев подозрительных колоний на скошенный МПА или Клиглера

6. Изучение характера роста на скошенном МПА (Клиглера)

7. Посев выделенной культуры на биохимический ряд

Методические указания к практической работе:

Исследуемый материал: слизь из зева и носа, отделяемое ран, кровь, моча, спинномозговая жидкость, мокрота, секционный материал, смывы с предметов обихода и рук персонала. Гной, экссудаты из закрытых полостей берут с помощью шприца, предварительно обработав кожу в месте прокола антисептиками в течение 1-2 мин. Свищи, фистулы, открытые гнойные очаги первоначально очищают от отделяемого стерильным тампоном и забор материала производят из глубины. Материал доставляют в лабораторию не позднее, чем через 1-1,5 часа с момента забора. Если немедленная доставка не возможна, образцы хранят в холодильнике при +4 - +6^о.

1 этап исследования: исследуемый материал засевают бактериальной петлей или ватным тампоном на 1,5% МПА питательный агар, 5% кровяной агар, на низкоселективные среды для энтеробактерий - ЭНДО, ЭМС и на селективные среды для псевдомонад - среды с добавлением нитрофуранов или ЧАО (четвертичные аммониевые основания) - бриллиантовой зелени, 1% этонит, ацетамида (ацетамидный агар). Все посевы инкубируют в термостате при 37⁰ 18 – 24 часа.

При микроскопии мазка из исследуемого материала обнаруживают грамотрицательные прямые палочки, располагающиеся по одному, парами или короткими цепочками.

2 этап:Изучают рост колоний на питательных средах. На МПА колонии Pseudomonas aeruginoza круглые, плоские, слизистые, полупрозрачные голубовато-серые с перламутровым оттенком, с неровным краем и металлическим блеском, пигментированные. Культуры псевдомонад образуют синий, зеленовато-синий или фиолетовый пигменты, проникающие в субстраты. Один из них – пиоцианин дающий синюю или сине-зеленую окраску. Другой – флюоресцеин дает зеленовато-желтое окрашивание, флюоресцирующее в УФ лучах. Пиоцианин образуют только штаммы синегнойной палочки, другие представители рода Pseudomonas могут образовывать флюоресцеин. На кровяном агаре вокруг колонии Pseudomonas aeruginoza образуются зоны гемолиза. На ЭНДО культуры образуют бледно-розовые колонии небольших размеров. Следует помнить, что Pseudomonas aeruginoza может давать 5 морфологических типов колоний:

1. Плоские, неправильной формы

2. Колонии напоминающие колонии кишечной палочки

3. Складчатые («цветок маргаритки»)

4. Слизистые, редко дающие пигментацию, и при первичном выделении образующие слизистый вал, со временем приобретающий зеленую окраску.

5. Карликовые, появляются только через 18 часов.

Очень часто можно наблюдать феномен «радужного лизиса», который характеризуется наличием нежного, блестящего металлического налета и зон лизиса.

Таким образом, уже на второй день можно идентифицировать примерно 75% выделенных культур синегнойной палочки по наличию роста на селективной среде, свойствам колоний, образованию сине-зеленого пигмента (пиоцианина) и специфическому запаху – жасмина или земляничного мыла.

Безпигментные колонии, выросшие на селективной среде, и подозрительные на псевдомонады колонии исследуют на способность образовывать цитохромоксидазу, для чего исследуемую культуру наносят на смоченную физ. раствором индикаторную бумагу. При положительной реакции на месте нанесения культуры в течение 30 секунд появляется синее окрашивание бумаги. Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму. При наличии в мазках грамотрицательных палочек и положительного теста на оксидазу подозрительные колонии отсевают на среду накопления чистой культуры(скошенный МПА или Клиглера) или на биохимический ряд. Для этого

безпигментные колонии, давшие положительный цитохромоксидазный тест, отбирают и суспензируют в 0,5 мл ИХН, а затем отсевают на среды:

1. Кинг А – используют для усиления способности синегнойной палочки вырабатывать пиоцианин. На среде Кинг А в случае высева синегнойной палочки вокруг колоний наблюдается сине-зеленое окрашивание.

 

Однако оно может и отсутствовать, если штамм не образует пиоцианин. Некоторые штаммы псевдомонад образуют на этой среде пигмент пиорубин, дающий красное окрашивание.

2. Среда Хью-Лейфсона – применяют для определения способности псевдомонад окислять глюкозу до глюконовой кислоты только в аэробных условиях. Посев производят в две пробирки с МПБ, глюкозой и бромтимоловым синим, одну из которых заливают 1мл стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют в термостате при 37⁰С 18-24 часа. При положительном результате происходит пожелтение среды в пробирке без вазелина, т.к. Pseudomonas aeruginoza окисляет, но не ферментирует глюкозу.

3. Две пробирки со скошенным МПА и инкубируют при 42⁰С и при +4⁰С. Pseudomonas

aeruginoza растет при температуре 42⁰С (учет 4 дня), а при +4 – растут только психрофилы (учет 10 дней).

4. Производят посев на арабинозу (+), 10% лактозу (-), полужидкий агар(+), среду Симмонса (растет, но не изменяет цвет среды), 1% пептонную воду для выявления индола(+), на среду с фенилаланином(-), аргинин(+).На среде Клигкера Pseudomonas aeruginoza не изменяет цвет среды, т.к. не ферментирует глюкозу и лактозу.

5. Проба с хлороформом – засевают культуру на скошенный МПА, инкубируют при комнатной температуре после чего наливают в пробирку хлороформ, который через 15мин окрашивается в голубой цвет из-за экстракции пигмента.

Рост культур на селективных средах, способность расти при 42⁰С и отсутствие роста при 4⁰С позволяет отнести выделенную культуру к виду P. aeruginoza.