Определение LE-клеток

На определении LE-клеток (Lupus Erythematosus cells - клетки красной волчанки) основан первый лабораторный метод диагностики системной красной волчанки, разработанный в 1948 г., и широко используемый в нашей стране до сих пор.

LE-феномен имеет три морфологических признака: тельце, розетка, LE-клетка (см. рис1.). LE-феномен является следствием как реакции антител, так и фагоцитоза опсонированного материала клеточных ядер.

Тельце образуется следующим образом. Известно, что LE сывороточный фактор представляет собой антиядерное аутоАт. В результате его соединения с составными частями ядер клетки последние погибают, ядра оголяются. Эти измененные, освобожденные от протоплазмы ядра лейкоцитов и представляют собой LE тельце. Под действием хемотаксиса около LE-тельца скапливаются активные сегментоядерные лейкоциты, образуя форму розетки.

Рис.1 Морфология LE-феномена

LE-клетки представляют собой зрелые нейтрофилы или моноциты с крупными гомогенными базофильными включениями в виде гомогенных аморфных глыбок, состоящих из деполимеризированных ДНК. Вследствие включения крупного свободного ядра других распавшихся клеток ядро фагоцита смещено к краю за счет включения. Таким образом, LE-клетка является конечной морфологической фазой LE-феномена.

In vivo LE-клетки присутствуют в периферической крови, перикардиальном и плевральном выпотах, а также в области поражения кожи. Тестом на выявление LE-клетокопределяют антитела к нуклеопротеидам в 75 (70-95)% случаев. Однако, выявление LE-клеток - трудоемкий и недостаточно чувствительный метод лабораторной диагностики системной красной волчанки, поэтому сейчас для диагностики этого и других аутоиммунных заболеваний используются более простые, легко воспроизводимые методы, основанные на определении антинуклеарных антител (иммунофлуоресцентным или иммуноферментным методами).

Определение ревматоидного фактора (РФ)

Диагностическое значение ревматоидного фактора состоит в том, что в высоких титрах они выявляются преимущественно у больных ревматоидным артритом (РА). Нали­чие РФ подтверждает клинический диагноз. Это легло в основу современного подразделения РА на серопозитивный (при нали­чии РФ) и серонегативный (при его отсутствии). РФ определя­ется у 70—80 % больных РА. Имеет прогностическое значение, поскольку свидетельствует о неблагоприятном течении болезни, быстром развитии эрозивно-деструктивного процесса, угрозе воз­никновения системных проявлений при РА.

Ревматоидный фактор - это аутоантитела к Fc-фрагменту IgG. В сыворотке ревматоидный фактор обычно присутствует в виде комплекса с IgG.

Определение ревматоидного фактора играет важную роль в диагностике ревматоидного артрита, при котором наблюдаются значительные нарушения иммунной системы. Они обусловлены неполноценным иммунным ответом с образованием иммунных комплексов. В формировании последних основную роль играет РФ.

В низком титре (до 1:80) ревматоидный фактор выявляется у 5% здоровых лиц моложе 60 лет и у 30% — старше 80 лет. Более чем у 75% больных ревматоидным артритом титр ревматоидного фактора в реакции латекс-агглютинации превышает 1:80. В высоком титре ревматоидный фактор выявляется у больных с тяжелым прогрессирующим ревматоидным артритом. При этом обычно наблюдаются внесуставные проявления заболевания, например ревматоидные узелки, системный васкулит, синдром Шегрена. При синдроме Шегрена ревматоидный фактор определяется в наиболее высоком титре. Ревматоидный фактор в сыворотке обычно появляется через 3—6 мес после начала ревматоидного артрита. У серопозитивных больных (больные, в сыворотке которых выявляется ревматоидный фактор) во время ремиссии титр ревматоидного фактора значительно снижается, хотя обычно не нормализуется. Ревматоидный фактор не специфичен для ревматоидного артрита и выявляется при других аутоиммунных заболеваниях, сопровождающихся поражением суставов, инфекционном эндокардите, некоторых хронических заболеваниях печени и идиопатическом фиброзирующем альвеолите

Любые частицы, покрытые IgG, могут быть агглютинированы ревматоидным фактором. Первоначально для обнаружения ревматоидного фактора использовались покрытые антителами эритроциты барана или человеческие эритроциты группы 0 (Реакция Валера-Роза). В последующем их заменили на частицы латекса и бентонита, что повысило чувствительность метода.

Реакция Ваалера-Роза. Используются эритроциты барана, нагруженные антителами кроличьей сыворотки. В присутствии РФ происходит склеивание (агглютинация эритроцитов) в результате взаимодействия его с гаммаглобулином, находящимся на поверхности эритроцитов барана. Реакция считается положительной при титре Ат, превышающем 1:16.

Латекс-тест. Исследование латекс-теста позволяет сделать полуколичественное определение РФ в неразбавленной сыворотке методом агглютинации латексных частиц. Метод удобен в использовании, экономически выгоден, время анализа - 2-3 мин. В наборе имеются положительный и отрицательный контроли.

Принцип метода. Основан на реакции агглютинации между РФ образца пациента или контрольной сывороткой и человеческим IgG, находящимся на полистироловых латексных частицах.

IgG, осажденный на латексных частицах + АТ к IgG, находящиеся в исследуемой сыворотке или положительном контроле ® агглютинация латекс-частиц, видная невооруженным глазом

Регистрация результатов :

· анализ образцов пациентов проводить после получения результатов отрицательного и положительного контролей;

· отсутствие агглютинации в сыворотке указывает на отсутствие РФ; отрицательным будет результат, содержащий в образце РФ менее 20 МЕ/мл;

· положительный: результат (четкая агглютинация) указывает на количественное содержание РФ в сыворотке пациента. При положительной реакции (четкая агглютинация) тест повторить, удваивая разведение сыворотки (1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:32 и т.д.). Наибольшее разведение, при котором происходит агглютинация, считается титром реакции. В сыворотке диагностическим титром в реакции латекс – агглютинации считается 1:20.

Произвести пересчет содержания РФ в МЕ/мл. Приблизительные значения РФ в международных единицах на мл соответствуют наивысшему разведению с положительным результатом, умноженным на 10.

Концентрация РФ равная 20 МЕ/мл в плазме – диагностическое значение и свидетельствует о ревматоидном процессе.