Задание 3. Окрашивание препаратов риккетсий по Здродовскому

Готовят фиксированный препарат риккетсий, окрашивают в течение 5 минут разведенным фуксином Циля (10–15 капель на 10 мл дистиллированной воды), промывают водой. Затем мазок обрабатывают 0, 5 % раствором лимонной кислоты или 0, 01 % раствором хлористоводородной кислоты, промывают водой. Далее препарат окрашивают метиленовым синим в течение 1 минуты, промывают водой и высушивают. Риккетсии окрашиваются в красный цвет, цитоплазма клеток, в которых они паразитируют – в голубой, а ядра – в синий.

Контрольные ВОПРОСЫ

1. Какие морфологические особенности актиномицетов позволяют дифференцировать их от микроскопических грибов?

2. Какие методы окрашивания используют при микроскопировании актиномицетов?

3. Какие методы микроскопического исследования используют при изучении материала, содержащего спирохеты?

4. Какие морфологические особенности обуславливают тинкториальные свойства спирохет?

5. Какой краситель позволяет дифференцировать спирохеты разных родов?

6. Какие методы микроскопирования используют при изучении хламидий и риккетсий и почему?

1.4 Морфологические особенности и ультраструктура
микроскопических грибов и простейших

Цель занятия

Познакомиться с особенностями морфологии и ультраструктуры микроскопических грибов и простейших, а также с особенностями приготовления и окрашивания их препаратов.

Основные сведения

Микроскопические грибы (предмет изучения микробиологов) объединяют представителей трех классов: Zygomycetes, Ascomycetes и Deuteromycetes (включенные в отдел Eumycota). Определяют микроскопические грибы по способу спороношения и морфологии спороносцев. Спороношение лучше наблюдать в чашках Петри, рассматривая более тонкие части колоний при малом увеличении микроскопа в проходящем свете при опущенном конденсоре. Материал для микроскопического исследования (приготовления нативного препарата) осторожно переносят иглой с поверхности колонии в каплю воды на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают под большим увеличением микроскопа. На препарате находят места, где можно рассмотреть устройство конидиеносцев, форму конидий. При исследовании фиксированных препаратов используют окраску сложными методами (По Романовскому-Гимзе, по Граму). Многие грибы (дрожжевые и дрожжеподобные) хорошо окрашиваются простыми методами анилиновыми красителями. При микробиологической диагностике дерматомикозов исследуемый материал (чешуйки кожи, волосы, соскоб ногтевых пластинок) помещают на предметное стекло в каплю 10% раствора гидроксида натрия и осторожно подогревают над пламенем спиртовки (можно в каплю спирта с глицерином без нагревания). Затем накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Зигомицеты имеют не разделенный на отдельные клетки многоядерный мицелий. К числу зигомицетов относятся мукоровые грибы Rhizopus, Phycomyces, Absidia. При рассмотрении с большим увеличением мицелий мукоровых грибов представляется как одна гигантская ветвистая клетка с большим количеством ядер. Еще более характерно спороношение мукора: приподнимающиеся спорангиеносцы заканчиваются наверху шаровидными образованиями – спорангиями, наполненными эндоспорами. Когда оболочка спорангия лопается, споры высыпаются наружу.

Аскомицеты (сумчатые грибы) образуют гифы, которые, в отличие от зигомицетов, разделены поперечными перегородками. Особенностью этих грибов является характерный орган спороношения – аск, в котором формируются аскоспоры. Значительная часть аскомицетов способна размножаться неполовым путем с помощью конидий. Аскомицетные дрожжи могут размножаться и половым путем, образуя аски с 2–8 спорами. Клетки дрожжей могут иметь овальную, шаровидную или удлиненную форму и достаточно крупные размеры (5–20 мкм). На определенных стадиях развития некоторые дрожжи образуют мицелий или псевдомицелий, на концах которого можно обнаружить споры.

Дейтеромицеты (несовершенные грибы) – разнообразная группа грибов с отсутствующей (или не обнаруженной) половой стадией размножения. К дейтеромицетам относят так называемые плесневые грибы - представителей родов Penicillum и Aspergillus, Trichoderma и некоторые дрожжи – Candida, Rhodotorula. Плесневые грибы имеют ветвящийся многоклеточный мицелий, хорошо различаются они по морфологии спороносных частей мицелия. У леечной плесени (р. Aspergillus) на приподнимающихся неветвистых конидиеносцах образуются бесцветные вздутия, на которых затем вырастают палочковидные клетки (стеригмы), на концах стеригм развиваются цепочками споры (конидиеспоры). У представителей р. Рenicillum (кистевики) конидиеносцы двукратно вилкообразно ветвятся, на концах первичных или вторичных веточек образуются конидиеспоры. Вся спороносящая часть мицелия этих грибов имеет форму кисточек.

Простейшие составляют большую группу одноклеточных гетеротрофных микроорганизмов, широко распространенных в природе. Размножение простейших осуществляется половым и бесполым путями, иногда оба способа воспроизводства составляют стадии единого жизненного цикла организма. Для микроскопического исследования простейших готовят нативные и фиксированные препараты. При прижизненном микроскопировании простейших отмечают характер движения. Фиксируют препараты простейших химическим способом (спирто-эфирной смесью) или в пламени спиртовки, окрашивают обычно по Романовскому-Гимзе или фуксином. При окрашивании по Романовскому-Гимзе ядра клеток окрашиваются в красный цвет, цитоплазма – в голубой или сиреневый.

Содержание лабораторной работы