Проведение анализа. 1. Гидролиз фосфатидилхолина

1. Гидролиз фосфатидилхолина

Кусочек яичного желтка помещают в пробирку, добавляют 1-2 мл 10% раствора NaOH, кипятят в водяной бане 15 минут.

Открытие холина

Холин при нагревании в щелочной среде превращается в триметиламин N(CH3)3, который обнаруживается в конце гидролиза по запаху селедочного рассола

2. Гидролизат делят на 3 пробирки

Открытие жирных кислот	К гидролизату 1-й пробирки прибавляют по каплям 10% раствор HCl до появления хлопьевидной взвеси жирных кислот
Открытие фосфорной кислоты	Ко 2-й части гидролизата осторожно добавляют 5-7 капель концентрированной HNO3 и по каплям молибденовый реактив до появления желтого осадка фосфомолибдата аммония. При необходимости нагревают в кипящей водяной бане. После охлаждения пробирки в струе воды фосфомолибдат аммония выпадает в осадок
Обнаружение глицерола	К 3-й части гидролизата добавляют 5 капель 10% раствора NaOH и 1 каплю 1% раствора CuSO4, перемешивают. Образуется хелатное соединение меди с глицеролом ярко-синего цвета

Оформление работы

Записывают результат реакций и выводы в виде таблицы:

Продукты гидролиза фосфатидилхолина	Результат реакции	Вывод о наличии
Холин Жирные кислоты Фосфорная кислота Глицерол

Тема 9.2.
Внутриклеточный обмен жирных кислот
и триацилглицеролов

Актуальность

Триацилглицеролы (нейтральные жиры) – сложные эфиры глицерола и высших жирных кислот. Знание особенностей обмена нейтральных жиров необходимо для понимания метаболических сдвигов при голодании и мышечной работе, для изучения патогенеза таких заболеваний, как ожирение, сахарный диабет, атеросклероз.

Знакомство с методом определения в крови содержания триацилглицеролов позволяет использовать эти сведения для диагностики заболеваний, связанных с нарушением липидного обмена.

Цель

Изучение метаболизма триацилглицеролов и его регуляции. Транспортные формы триацилглицеролов.

Приобретение практических навыков определения качества пищевого жира, концентрации триацилглицеролов в крови и кетоновых тел в моче.

Вопросы для самоподготовки

1. Реакции цикла трикарбоновых кислот, их связь с дыхательной цепью и выход энергии. Процесс окислительного фосфорилирования. Понятие дыхательного контроля.

Характеристика синтеза жирных кислот из глюкозы по плану:

локализация и условия протекания процесса,

реакции образования ацетил‑ SКоА из глюкозы,

роль цитрата в переносе ацетильной группы в цитозоль, его дальнейшие превращения,

реакция синтеза малонил-SКоА,

строение мультиферментного синтазного комплекса, химизм реакций, происходящих в комплексе,

конечный продукт синтеза,

участие витаминов и коферментов, источники НАДФН, роль " малик" -фермента,

регуляция процесса при участии гормонов инсулина, адреналина, глюкагона,

влияние АТФ, ацил-SКоА, малонил-SКоА, цитрата на реакции синтеза жирных кислот.

Реакции синтеза глицерол-3-фосфата из глюкозы. Локализация и роль процесса.

Реакции синтеза фосфатидной кислоты из жирных кислот и глицерол-3-фосфата по плану:

локализация в клетке,

источники глицерол-3-фосфата, жирных кислот и энергии,

последовательность реакций,

связь с обменом углеводов,

дальнейшие пути использования фосфатидной кислоты.

Строение триацилглицеролов, их жирно-кислотный состав. Реакции синтеза триацилглицеролов (липогенез). Условия протекания липогенеза в печени и жировой ткани. Связь синтеза триацилглицеролов с обменом углеводов.

Источники ТАГ в печени. Характеристика липопротеинов очень низкой плотности: их состав, апобелки, функция. Схема строения ЛПОНП. Условия, при которых образуются эти липопротеины. Утилизация ЛПОНП в тканях. Роль липопротеинлипазы.

Сходство и отличие биосинтеза триацилглицеролов в жировой ткани и печени.

Характеристика реакций липолиза по плану:

локализация и условия протекания процесса,

последовательность реакций и ферменты,

конечные продукты,

гормональная регуляция процесса,

транспорт и использование свободных жирных кислот, образующихся при липолизе.

Гормоночувствительная липаза, роль аденилатциклазной системы в регуляции ее активности. Регуляция липазы гормонами адреналином, глюкагоном, кортизолом и инсулином. Аллостерическая регуляция активности ферментов липолиза и липогенеза.

Реакции окисления глицерола до пирувата. Возможные пути метаболизма пирувата. Энергетический выход окисления пирувата в аэробных и анаэробных условиях.

Реакции окисления жирных кислот до углекислого газа и воды:

роль карнитина в окислении жирных кислот,

локализация и условия протекания b‑ окисления,

последовательность реакций b‑ окисления и ферменты,

участие витаминов и коферментов,

конечные продукты,

связь с ЦТК и дыхательной цепью,

энергетический выход процесса,

расчет энергетической ценности b-окисления пальмитиновой кислоты.

Особенности обмена триацилглицеролов при некоторых физиологических состояниях (потребление пищи, голодание, мышечная активность). В чем особенность бурой жировой ткани?

Причины нарушений обмена триацилглицеролов – ожирение, гиперлипопротеинемия I типа (гиперхиломикронемия) и V типа.

Реакции синтеза кетоновых тел. Условия, локализация и роль процесса. Реакции утилизации кетоновых тел в тканях. Причины кетоацидоза при голодании и сахарном диабете. Роль дефицита оксалоацетата для активации кетогенеза.

Определение кислотного числа жира. Принцип метода, его практическое значение и нормальные показатели.

Исследование концентрации триацилглицеролов в сыворотке крови. Клинико-диагностическое значение и нормальные показатели.

Обнаружение кетоновых тел в моче. Изучение концентрации кетоновых тел в моче. Принцип методов. Клинико-диагностическое значение и нормальные показатели.