Ход работы. Хроматографическую (фильтровальную) бумагу разрезают на полосы шириной 2-3 см и длиной, соответствующей высоте хроматографичесокой колонки

 

Хроматографическую (фильтровальную) бумагу разрезают на полосы шириной 2-3 см и длиной, соответствующей высоте хроматографичесокой колонки. Волокна хроматографической бумаги должны располагаться вдоль. На расстоянии 1-2 см от края бумажной полоски отмечают карандашом стартовую линию. На бумагу вдоль стартовой линии наносят исследуемый раствор аминокислот. Одновременно на другие полоски наносят растворы стандартных аминокислот – маркеров. Бумажные полоски просушивают на воздухе.

Подготовленные пробы помещают в хроматографическую колонку для разделения. Предварительно на дно колонки наливают органический растворитель - насыщенный водой раствор фенола. Закрепляют бумажные полосы так, чтобы нижний конец был погружен в растворитель (но не касался линии старта!). Герметически закрывают крышку хроматографической колонки. Через 2 ч бумажные полосы извлекают из сосуда, отмечают фронт растворителя и высушивают в сушильном шкафу при 100 ^оС в течение 10-15 мин. Хроматограммы проявляют нингидрином и снова подсушивают при 100 ^оС в течение 5-10 мин.

Аминокислоты в процессе реакции с нингидрином приобретают сине-фиолетовую специфическую окраску и располагаются в виде пятен по длине бумажных полос.

 

Оформление результатов

Фронт движения для каждой аминокислоты характеризуется коэффициентом R_f, находят коэффициент и идентифицируют каждую аминокислоту, используя маркеры. Результаты исследований вносят в таблицу.

 

Наименование объекта исследования	Фронт, пройденный аминокислотой, см	Коэффициент Rf	Присутствие в исследуемом объекте
Глицин Лизин Аспарагиновая кислота

 

Выделение белков из биологических систем

Лабораторная paбота № 5

Осаждение белков

 

Цель работы: освоение методов осаждения белков из исследуемых материалов.

Оборудование, реактивы и материалы: набор пробирок в штатив, электроплитка, спиртовка, держалки для пробирок; резиновая груша, шпатели, пипетки вместимостью 1, 2 и 5 см3, воронки, бумажные фильтры; кристаллический хлорид натрия; насыщенный раствор сульфата аммония; этанол с массовой долей 96 %; раствор ацетона с массовой долей 80 %; раствор сульфата аммония с массовой долей 10 %, раствор уксусной кислоты с массовой долей 0, 01 моль/дм3; белок куриного яйца (10 см3 яичного белка растворяют в 100 см3 дистиллированной воды), раствор яичного альбумина (белок куриного яйца отделяют от желтка, смешивают с пятикратным объемом воды и выпавший в осадок яичный глобулин отфильтровывают, в фильтрате содержится яичный альбумин); белки растительного происхождения (муку злаковых или бобовых массой 5 г вносят в коническую колбу, добавляют 20 см3 раствора сульфата аммония с массовой долей 10 %, перемешивают и настаивают 30 мин при комнатной температуре, фильтруют через бумажный фильтр, фильтрат используют в качестве раствора белка); раствор казеина с массовой долей 0, 2 % (0, 2 г казеина растворяют при нагревании в 10 см3 раствора ацетата натрия с массовой долей 1 моль/дм3 и доводят водой до 100 см3).