V Биуретовая реакция на пептидную связь (Пиотровского)Биуретовая реакция открывает пепетидную связь Её способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. Положительную биуретовую реакцию отдельные аминокислоты не дают, за исключением гистидина (His), серина (Ser), треонина (The) и аспарагина (Asn), с которыми биуретовая реакция получается при условии больших концентраций их в растворе. При добавлении сернокислой меди к сильнощелочному раствору белка или полипептида образуются соединения меди с пепетидной группировкой, окрашенные в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет в зависимости от длины полипептидной цепи. Раствор белка даёт сине-фиолетовое окрашивание, а продукты неполного гидролиза (пептоны) – розовое или красное окрашивание. Принцип метода. В сильно щелочной среде пептидные группы полипептидных цепей переходят в енольную форму, которая, взаимодействуя с ионами Cu2+, образует окрашенный (фиолетового цвета) биуретовый комплекс. При этом енольная форма полипептида, образованная в сильнощелочной среде, дает отрицательный заряд, и ее кислород, взаимодействуя с медью, образует ковалентную связь, а медь, взаимодействуя с атомами азота, образует координационные связи.
Енольная форма пептидной связи (
Комплекс фиолетового цвета
|
в белке.
)
